吐露港提供EMSA（凝胶阻滞）技术服务

服务简介 

凝胶阻滞或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前也广泛用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。反应体系中常加入随机打断的鲑鱼精DNA或polydI-dC来防止非特异性竞争；亦可以添加未标记的DNA或RNA探针，进行特异性竞争实验以确定该结合是特异性的。

吐露港生物科技有限公司目前提供EMSA技术服务。吐露港生物汇聚了一批分子生物学领域的技术专家，开发了采用荧光标记探针DNA的技术，可以更灵敏地检测EMSA结合情况。相比于传统的同位素标记、地高辛标记以及生物素标记，荧光法标记的优势非常明显。

服务优势

1. 安全环保：荧光法标记由于不使用同位素，因此，该方法对环境非常友好，也更安全；

2. 快捷真实：相比于地高辛和生物素标记，荧光法标记的探针由于不需要Western-blot杂交等信号放大过程，可以通过仪器直接读取信号，因此，所读取的信号强度更加真实，而且速度上更快。

服务流程

说明：如质检不通过，我们将停止实验；在与客户充分沟通并确定新的实验方案后，我们可以继续进行测试。

样品要求

1，提供纯化的蛋白：纯化的蛋白纯度要在90%以上（经SDS-PAGE只有电泳一条带）。如果纯度不够，或者有杂带的话，可能会影响后续实验结果的分析。例如，不能确定到底是目的蛋白与靶标DNA结合还是杂蛋白与靶标DNA结合；同时，也不能确定杂蛋白是否会影响目的蛋白结合靶标DNA的能力。同时，蛋白浓度不应低于0.3 mg/mL。

2，提供组织样本：若客户自己抽提蛋白，则应保证蛋白浓度不低于1mg/mL。吐露港公司亦可以提供蛋白抽提服务，具体收费标准见“服务收费”部分。

3，提供质粒DNA：要求客户将靶标DNA克隆到通用载体上，如吐露港的pUC18B-T载体或者TakaRa公司的pMD18-T等，经过测序无误后方可进行后续的探针制备和EMSA实验。吐露港提供载体构建服务，具体收费标准见“服务收费”部分。

收费标准

注明：

1，一般来讲，我们制作可用于发表的EMSA图片时，会选择3个蛋白浓度梯度（从0开始），并在反应体系中添加防止非特异性竞争的polydI-dC或者打碎的鲑鱼精DNA。如果客户需要添加特异性的cold probe竞争（冷探针竞争），则需要另付500元费用；如果还需要添加蛋白特异性抗体以进行super-shift实验的话，则也需要另付500元费用（一般来讲，对于组织样本的EMSA反应，添加特异蛋白的抗体比较重要；而对于纯化的蛋白，则一般不需要；抗体需要客户自己提供，或由吐露港代为购买）。

2，靶标探针的克隆和目的蛋白的表达载体构建可以同步进行；一般整个实验周期在10个工作日左右。如有特殊情况，请联系我们的技术人员（support@tolobio.com）；我们将和您共同制定一套加急方案，但是需要收取加急费用（原来费用的1.5倍）。

3，若EMSA的质检不合格，我们仍将收取质检费用（按次收取），并提供相应的质检报告。

4，对于吐露港提供的任何结果，我们均保证其可重复性。若投稿时，reviewer提出任何关于图片质量方面的问题，吐露港将负责解答并提供相应的解决方案。我们的宗旨是：负责到发表！