蛋白质印迹(Western blotting)又称免疫印迹(immunoblotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的母的蛋白的方法。该方法包括三个部分：   SDS-PAGE凝胶电泳，蛋白质的电泳转移，免疫印迹分析。由于免疫印迹具有SDS-PAGE 的高分辨力和免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白质分析领域的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定目的蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

操作步骤

1. 获取细胞或组织裂解物

2. 蛋白质定量

常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用，或者直接进行电泳分离蛋白。

3. 电泳分离蛋白质

4．转膜

根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、硝酸纤维素膜（NC膜）和尼龙膜，其中PVDF和NC膜的使用频率最高。

5．封闭

去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。常用的封闭溶液有：含BSA或者脱脂奶粉的TBST或TBS。

6．孵育一抗

一抗的选择成功与否，是整个WB实验成功的关键。

7. 孵育二抗

根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索最佳稀释度（1:1000-1:20000）。孵育条件一般为室温1-2小时。

8. 底物孵育

选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。

9．结果分析和检测

凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片。

客户提供

1.足够量的生物样品，有具体要求请事先说明；

2.适合的一抗，如需我们采购请事先说明；

3.相关背景资料等。

服务期限

    7个工作日。

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全套实验方法、一般实验试剂和实验报告。

质量保证 

我们的质控部门保证所提供的实验结果真实客观有效。