【细胞生长曲线的测定实验目的】

掌握绘制细胞生长曲线的原理和方法。

【细胞生长曲线的测定背景与原理】 生长曲线是测定细胞生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后渡过长短不同的潜伏期，即进入快速生长的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细 胞数目的动态变化，需连续对细胞进行计数。通常计数6天。为精确起见，一般每次实验设3个平行重复。

【材料、试剂与仪器】

1、实验材料： Hela细胞系。

2、实验试剂： DMEM培养基（青霉素，链霉素，10%血清），0.25%胰蛋白酶溶液，台酚蓝染液。 3、 实验仪器： 超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，微量移液器，血细胞计数板，培养瓶，离心管，移液管，废液缸，盖玻片，24孔板。

【方法与步骤】

1、取生长良好的细胞，用培养基制成细胞悬液后计数。根据细胞计数结果按5×104/mL作传代培养接种于24孔板中，共接种21孔细胞。1ml/孔。余下三孔可设传代培养的对照。

2、24h后每天记录细胞数目，每次取3孔细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基，混匀制成细胞悬液。取少量悬液与台酚蓝1:1混合。取一干净的血细胞计数板， 盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。注意滴液勿有气泡，也不能太多，否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。

3、低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。 找出计数板上的方格，计算四角大格内总细胞数，压大格线者只计左侧和上方，不计右侧和下方细胞悬液中细胞密度计算公式为：细胞数/mL=（四角大格内细胞数/4）×104×2

4、根据细胞计数结果，以单位细胞数（细胞数/mL）为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。

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