| 产品介绍

CRISPR基因敲除试剂盒(Cas9x3.0)是海星生物在多年基因编辑服务的基础上研发的高效快捷的基因敲除试剂盒。包括了人(Human)和小鼠(Mouse)的所有基因的敲除。

Cas9x3.0试剂盒包含2个Cas9X™算法优化的gRNA序列载体和特异的同源DN**段，DN**段含有抗性和GFP荧光，并携带有一段特殊同源序列，不仅可为后续基因敲除细胞的筛选提供药物抗性，也可以通过流式筛选获得敲除细胞。

Cas9x3.0试剂盒对分裂细胞和非分裂细胞都有非常高的敲除效率。

| 产品特点

敲除高效率——比病毒敲除方式更实惠、更稳定、更安全

实验超简单——操作流程简单，能养好细胞就能做基因敲除

| 产品构成

| 产品原理

CRISPR基因敲除试剂盒 (Cas9x3.0)依据HDR和NHEJ修复原理进行产品开发。

优化的gRNA引导Cas9蛋白对特定位点进行切割，产生DNA双链断裂（Double-Strand Break, DSB），并诱导同源线性化DN**段（携带抗性基因和荧光基因）整合到该位点，再通过抗性药物（puroR）或荧光（GFP）进行筛选，从而获得基因敲除的细胞和单克隆。

CRISPR基因敲除试剂盒 (Cas9x3.0) 的敲除效率是传统基因敲除策略的2~5倍。因为其独有的敲除策略是通过在基因位导入Donor DNA（ puroR & GFP ）从而达到敲除目的蛋白效果，同时也可以在DSB位点导入序列移码，导致蛋白翻译提前终止。这两个原理的叠加，可以轻松获得“等位基因”纯合敲除细胞株。

| 应用流程

CRISPR基因敲除试剂盒 (Cas9x3.0)操作步骤(脂质体转染法)：

本试剂盒建议采用转染试剂是Lipofectamine® 2000 Reagent (cat#11668-030)，具体参照转染试剂说明材料。不同类型的转染试剂，请按照制造商的操作说明进行转染。

注意：悬浮细胞不推荐使用脂质体转染法。

CRISPR基因敲除试剂盒 (Cas9x3.0)操作步骤(电转化法)：

本试剂盒推荐Neon转染系统，具体参照设备对每种细胞参数。不同类型的电转设备，请按照制造商的操作说明进行优化。

注意：悬浮细胞推荐使用电转化法。

CRISPR基因敲除试剂盒 (Cas9x3.0)配有eGFP对照DNA，可以按照实际使用的方法和细胞情况，进行实验摸索，建议48小时后的目的细胞的eGFP的阳性率不低于50%， Cas9x3.0试剂盒才能获得最佳敲除效果。