1. 表达载体构建（可选）

首先根据您具体的需求，对蛋白基因进行序列分析。通过业界领先的NG^® Codon优化软件，基因的表达量可提高几倍至数十倍。进行基因合成并通过测序验证重组质粒100%序列正确。泓迅科技可以提供将基因直接克隆进甲醇诱导的pPICZα、pPIC9K或组成型pGAPZα等商业化的表达载体之中。此外，您也可以选择泓迅科技特有的酵母特殊表达载体进行表达测试。

交付内容：冻干质粒1管（4ug/tube）和含有此质粒TOP10甘油菌1管

交付周期：10-20工作日

2. 线性化载体和电转化入毕赤酵母

您也可以直接交付给我们构建好的重组质粒（请确认序列的密码子进行过优化）。对于验证无误的重组质粒，我们选择合适的内切酶对其进行线性化，并采用电转方法转化入毕赤酵母细胞内。筛选阳性克隆，我们从中至少挑取6个克隆进行表达小试。

交付内容：阳性克隆的筛选报告

交付周期：5工作日

3. 表达条件的优化

小试的过程我们会优化测试中适合于菌株的培养条件，包括温度、培养基、诱导剂种类、诱导时机和诱导量等因素。我们默认使用SDS-PAGE进行表达效果分析，或Western blot（可选，客户提供验证过的一抗）进行分析。

交付内容：小试验证报告一份

交付周期：5工作日

4. 目标蛋白放大培养，表达和纯化

优化到合适表达条件的菌株，我们使用1L或更大的培养规模诱导重组酵母表达。诱导后，进行一步或者多步纯化。SDS-PAGE检测纯度，Western blot（可选，客户提供验证过的一抗）检测正确性。

交付内容：1-10mg重组蛋白以及纯化报告数据

交付周期：10-15工作日

对于有标签蛋白可选择切除服务（可选）。

5.蛋白后期加工（可选）

对于有进一步特殊要求的蛋白，泓迅科技为您提供多种后期加工选择，包括纯化后蛋白的标签切除、过滤除菌、内毒素祛除、冻干、N端测序等服务。对于您的特殊需求，我们经验丰富的工程师可以为您提供量身定制的后期服务

交付内容：垂询

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