植物直扩PCR试剂盒（含染料）
产品名称： 植物直扩PCR试剂盒（含染料）
英文名称： Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
产品编号： N132023
产品价格： null
产品产地： 美国
品牌商标： Arcegen
更新时间： 2025-08-28T11:57:06
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 50 T | 700.0 |
| 200 T | 1900.0 |
- 联系人 : 钟珍
- 地址 : 申江南路4388号1幢2层208室
- 邮编 : 201314
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****6764 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : zhongz@magibagbio.com
- 二维码 : 点击查看
产品简介
本品是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mm植物叶片即可进行实验。
本试剂盒中提供的2× Plant PCR Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率且含有示踪染料，PCR产物可直接电泳。
该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。
产品规格
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产品货号 |
N132023E |
N132023S |
|
产品规格 |
50 T |
200 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
N132023E (50 T) |
N132023S (200 T) |
储存条件 |
|
N132023-A |
Buffer P1 |
1.25 mL×2 |
5 mL×2 |
2-8℃ |
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N132023-B |
Buffer P2 |
500 μL |
1 mL×2 |
2-8℃ |
|
N132023-C |
2 × Plant PCR Master Mix* |
500 μL |
1 mL×2 |
-25~-15℃ |
【注】：*2× Plant PCR Master Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等，同时包含电泳Loading Buffer，PCR完成之后可直接电泳。
产品储存
1. 试剂N132023-A【Buffer P1】，置于2-8℃保存。有效期1年。
2. 试剂N132023-B【Buffer P2】，中和裂解产物，利于更长时间保存样本，置于2-8℃保存。有效期1年。
3. 试剂N132023-C【2×Plant PCR Master Mix】，-25~-15℃保存，避免反复冻融。有效期1年。
4. 试剂盒有效期1年。
操作注意
1) 做叶片实验时，建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，需-80℃保存，应尽量避免反复冻融，以免造成模板降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。
2) 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
3) 取样时使用打孔器或者刀取适宜大小的样本，样本不同时，打孔器或者刀每次处理样本前需清洗干净。
4) 对于叶片组织，建议取1-10 mm的叶片，过小会使PCR扩增产量低，过多会抑制PCR反应，采用加热裂解法、枪头捣碎、研磨仪破碎的方式处理植物叶片，处理后需震荡离心，务必取上清液试验，沉淀会严重抑制PCR反应。
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6) 本产品仅作科研用途！
操作说明
1. 植物叶片
1) 研磨裂解法：
a. 研磨仪破碎：将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，用研磨仪加钢珠（钢珠直径3 mm左右，共2个）破碎叶片（45 Hz，1 min），叶片破碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。
b. 枪头捣碎：推荐使用幼嫩叶片。将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，用枪头将叶片捣碎，捣碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。
2) 加热裂解法：推荐使用幼嫩叶片。将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，95℃加热5-10 min（确保裂解液完全浸没叶片），较难裂解的叶片（老叶片）可适当延长时间（10-20 min），加热裂解后溶液呈现绿色，震荡混匀，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。
3) 直接法：推荐使用幼嫩叶片。使用打孔器或者刀，将直径1 mm左右的叶片直接加入到PCR反应体系中；复杂样本或者是长片段的扩增，推荐使用直径<1 mm的叶片。
2. PCR反应体系
表1. PCR反应体系
|
组分 |
体积（μL） |
体积（μL） |
终浓度 |
|
2× Plant PCR Master Mix |
10 |
25 |
1× |
|
Forward Primer (10 μM) |
0.5 |
1 |
0.2-0.25 μM |
|
Reverse Primer (10 μM) |
0.5 |
1 |
0.2-0.25 μM |
|
裂解产物（DNA模板） |
1 |
2 |
- |
|
ddH2O |
To 20 |
To 50 |
- |
【注】：各组分使用前应充分混匀。
1) 模板加入量：小于PCR反应体系的5%，过多会严重抑制PCR反应，强烈推荐加入1 μL模板。叶片直扩优先推荐研磨仪裂解法。
2) 引物终浓度：0.2-0.25 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。
3) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
4) 体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
5) 对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
为了更稳定的保存裂解后的模板，将转移出来的上清液，按照裂解产物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合，混匀后-20℃保存，稳定保存随时间和样本状态不同而有所不同。如果处理后的植物叶片上清液一周内用于PCR扩增，不用加Buffer P2，上清液请保存在-20℃。
3. PCR反应条件
表2 PCR反应程序
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循环步骤 |
温度（°C） |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
94 |
5 min |
1 |
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变性 |
94 |
10 sec |
35 |
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退火* |
50-65 |
20 sec |
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延伸** |
72 |
1 min/kb |
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终延伸 |
72 |
5 min |
1 |
【注】：
1) *退火温度：请参考引物的理论 Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。
2) **延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1 kb以内的DNA片段，建议延长时间为1 min。
常见问题与解决方案
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常见问题 |
可能原因 |
解决方法 |
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阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 |
使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
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PCR试剂保存不当失去活性。 |
2×PCR Mix应保存于-25~-15℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在2-8℃短时间存放。 |
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引物设计问题。 |
尝试重新设计引物进行检查。 |
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阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 |
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 |
使用新鲜的试剂。 |
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裂解液、中和液加入比例不当，裂解混合液影响PCR体系的pH值。 |
正常条件下，中和后的裂解混合液的pH应该在7-8左右（裂解产物和Buffer P2严格按照5:1的量进行中和）。 |
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样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 |
裂解混合液可在2-8℃保存5天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 |
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模板加入量不适合。 |
在反应体系＜5%范围内优化模板加入量。 |
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PCR循环数不足。 |
适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 |
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非特异性扩增 |
PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 |
提高PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
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PCR引物错配。 |
重新设计PCR引物。 |
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配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 |
PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 |
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阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 |
实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
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样本间交叉污染。 |
每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |