6-磷酸葡萄糖脱氢酶（Glucose - 6- phosphate dehydrogenase，G6PDH试剂盒说明书（50T）
产品6-磷酸葡萄糖脱氢酶含量测定原理简介：

6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6 -磷酸葡萄糖酸内酯，同时
将NADP 还原为NADPH，以供生物合成及维持细胞内的还原状态，因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低
可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH 能使NADP 还原成NADPH，6-磷酸葡萄糖 + NADP →6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH；在一定
反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。本测试盒通过在340 nm 下测定NADPH
增加速率来反应G6PDH 活性的大小，NADPH 浓度升高越多则G6PDH 活力越大。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、蒸馏水
北京索莱宝科技有限公司供应生化法测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶含量测试盒产品组成：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：储备液50 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 支，-20℃保存；用时每只加275μL 双蒸水充分溶解备用；
试剂三：粉剂×2 支，-20℃保存；用时每只加275μL 双蒸水充分溶解备用。
操作生化法检测6-磷酸葡萄糖脱氢酶含量步骤：

一、待检测样品测定的准备：
(1) 细菌、细胞或组织样品的制备 ：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每 200 万细菌或细胞加入 400μL 提取
液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。8000g 离心10 分钟，取上清，置冰上待测。
组织：称取100mg组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待
测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：
测定管 对照管
试剂一（μL） 750 750
试剂二（μL） 10 10
试剂三（μL） 10 10
样本（μL） 30
蒸馏水（μL） 30
将上述试剂按顺序加入1 mL 石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340 nm 波长下记录20 秒时的
初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳动物用37℃，非哺乳
动物用25℃），准确反应5 分钟。迅速取出比色皿并擦干，340 nm 下比色，记录5 分20 秒时的吸光度A2，
计算ΔA=A2-A1。
实验中生化法检测6-磷酸葡萄糖脱氢酶含量注意事项：
1、若A2-A1 大于0.5，需将酶液用提取液稀释，使A2-A1 小于0.5，可提高检测灵敏度。
2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一37℃或25℃水浴放置。
3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将
此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
4、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
G6PDH活力单位的计算：
1、血清（浆）G6PDH活力的计算:
单位定义：每升血清（浆）在反应体系中每分钟生成1 μmol/L 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（U/L）= 857×(ΔA 测定管－ΔA 对照管)
2、组织中G6PDH活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol/L 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（U/mg prot）= 857×(ΔA 测定管－ΔA 对照管)÷蛋白质浓度（mg/mL）
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol/L 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（U/g mass）＝857×(ΔA 测定管－ΔA 对照管)÷样品鲜重（g/mL）
3、细菌或细胞中G6PDH活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol/L 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（U/mg prot）＝857×(ΔA 测定管－ΔA 对照管)÷蛋白质浓度（mg/mL）
（2）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol/L 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH（U/104 cell）＝857×(ΔA 测定管－ΔA 对照管)÷细菌或细胞密度（104 个/mL）


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