【实验原理】

采用蓝光光源照射人永生化角质形成细胞HaCaT，会出现一定的细胞毒性，抑制细胞增殖。蓝光波长比紫外线长，具有较强的穿透力，能够穿透皮肤表皮抵达真皮层，因此会影响皮肤屏障相关基因的表达，并使细胞产生氧化应激反应生成过量ROS，从而引起一系列的炎症反应和线粒体损伤，最终诱导细胞的凋亡甚肿瘤的发生。

【实验方法】

对人永生化表皮细胞HaCaT进行蓝光照射3h后，

1、计算添加和不添加受试物对于细胞的保护比率，若保护率≥1.5，则满足受试物对皮肤抵抗蓝光有防护作用。

2、检测皮肤屏障相关基因TGM1相对表达量

3、统计活性氧自由基数量，换算其清除作用。

4、检测炎症因子IL-1α、IL-6、IL-8或TNFα的分泌量。

5、拍摄线粒体膜电位荧光照片

【评价指标】

1、细胞活性保护比率；

2、皮肤屏障相关基因表达TGM1相对表达量；

3、ROS清除作用；

4、炎症因子IL-1α、IL-6、IL-8、TNFα分泌量；

5、线粒体膜电位的改变。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

1、细胞活性保护比率：提供细胞活性保护比率A值

2、皮肤屏障相关基因表达TGM1相对表达量：提供柱状图

3、ROS清除作用：提供柱状图

图2. ROS相对含量

4、炎症因子IL-1α：提供柱状图（以IL-1α为例）

图3. IL-1α相对含量

5、线粒体膜电位：提供荧光图片

图4. 线粒体膜电位效果图

正常细胞（vehicle）线粒体膜电位较高，荧光探针以聚合物形式存在于线粒体中，呈明亮的红色荧光，而细胞中的绿色荧光很弱；使用细胞凋亡诱导剂CCCP处理后线粒体膜电位下降，荧光探针不能以聚合物形式存在线粒体中，而是以单体形式存在于细胞浆中，此时线粒体内红色荧光强度显著降低，而细胞浆中绿色荧光显著增强。

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