3’RACE Kit
产品名称： 3’RACE Kit
英文名称： 3’RACE Kit
产品编号： PR6921
产品价格： 0
产品产地： 北京，百泰克公司
品牌商标： BioTeke
更新时间： null
使用范围： null
北京百泰克生物技术有限公司
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3’RACE Kit
产品编号 包装
PR6921 20次
产品说明:
本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3′末端全长的试剂盒。对RNA结构进行分析时，一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的DN**段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDN**段，而RACE法能有效地解决这一问题。Bioteke公司生产的3’RACE试剂盒能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3′末端的全长序列。本试剂盒中含有完成3′-RACE操作的主要试剂。试剂盒中使用的Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。进行3′RACE 实验时，首先由Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）将mRNA反转录成cDNA，然后再使用Bioteke LA Taq，以反转录的cDNA为模板，进行套式PCR反应。3′RACE Adaptor作为反转录引物用于合成1st Strand cDNA；使用基因上游外侧特异性引物1和3′RACE Primer 1进行1st PCR反应。如果1st PCR反应未能得到目的产物，再使用基因上游内侧特异性引物2和3′RACE Primer 2进行2nd PCR反应。PCR产物可以直接进行DNA测序或TA克隆。
产品组成：
制品可用于20次反转录反应（约100次3′RACE PCR反应）
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组分名称 |
20次 |
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Reverse Transcriptase M-MLV
（Rnase H-）（200U、μl） |
20μl |
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Rnase inhibitor （40U、μl） |
20μl |
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5×M-MLv Buffer |
80μl |
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dntp Mixture （10mM each） |
20μl |
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3’RACE Adaptor （10μM） |
20μl |
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Rnase Free d h2o： |
1ml |
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3’RACE Primer 1（10μM） |
200μl |
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3’RACE Primer 2（10μM） |
200μl |
实验时需要自备的其他试剂：扩增目的DN**段的上游特异性引物；PCR用DNA聚合酶。我们推荐使用Bioteke LA Taq，也可以根据实验需要选用其他PCR用DNA聚合酶。
试剂盒注意事项:
◆ 同时需要进行数次反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
◆ 使用Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）、RNase Inhibitor等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡，分取之前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
问题解答
1. RT-PCR反应后，无PCR产物或出现Smear，怎么办？
此时请从提取的RNA样品的纯度和添加量、基因的表达丰度、基因的长度和GC含量、引物的设计情况、参考文献的可信度以及RT-PCR条件的设定等方面加以考虑。
2. PCR反应时，反转录反应液的使用量使用多少较为合适？
反转录反应液的使用量可控制在1μl～10μl的范围。
3. 3′RACE PCR扩增产物经电泳分析后，有时为什么出现多条带现象？
可能是因为未知序列信息不清楚导致了非特异性扩增； 扩增的基因为多基因家族的成员；mRNA不同的拼接方式造成的。
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