斑马鱼体内基因功能分析之过表达

技术原理：

      为观察目的基因的过表达对早期胚胎发育的影响，可通过构建目的基因过表达载体，体外转录合成相应的mRNA,将mRNA以不同剂量注射到早期胚胎中，即可研究目的基因过表达对胚胎发育及组织器官形成的影响。

     过表达载体构建--目的基因mRNA体外转录--斑马鱼胚胎收集及显微注射--目的基因蛋白表达鉴定--相关通路基因定量检测/相关分子maker时空表达分析--表型分析

应用案例：

      混合系白血病1(MLL1)基因在早期胚胎发育和造血中起着至关重要的作用。MLL-AF9融合基因是染色体易位所致，常导致急性髓系白血病，预后差不好。
     
      研究者在斑马鱼胚胎中过表达人MLL-AF9融合基因相应mRNA,发现其过表达导致了斑马鱼的造血功能异常。

部分结果如下：

（a)Western blotting结果表明，与对照组相比，过表达时胚胎中MLL蛋白含量显著增加；

（b)定量PCR结果显示，MLL下游基因表达量显著上升；

 (c-e)整体原位杂交分析MLL下游基因表达变化；

（f-h)过表达MLL-AF9 mRNA时，髓系细胞标记基因l-plastin, mpy和 lyz表达量增加。

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