广州市锐博生物科技有限公司
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技术简介
T细胞受体(T cell receptor，TCR)是T细胞表面特异性识别抗原和介导免疫应答的分子，是人类基因组中多态性最高的区域之一，决定着人的免疫系统如何适应环境的变化。T细胞受体库的多样性(包括基因重组以及选择性表达)直接反映了机体免疫应答的状态。
TCR 可分为TCRα/β和TCRγ/δ两种类型, 外周血T细胞主要为TCRα/β的T细胞, 是介导机体特异性细胞免疫反应的主要细胞。如图1所示：TCRβ基因由可变区(V)、多变区(D)、结合区(J)和恒定区(C)四部分基因片段组成，形成互补决定区(complementarities determining region, CDR)和间隔的4个骨架区(framework region, FR)。在T细胞发育过程中CDR1，2和FR区域相对保守，CDR3区由V、 D和J 进行重排(如图2所示)而形成具有功能的TCR编码基因(T细胞克隆)，由于V (65-100种)、D (2种)、J (13种)基因片段本身具有多样性，此外，由于在重排的过程中，在VD及D-J的连接区经常有非模板的核苷酸的随机插入或删除，进一步增加了CDR3区的多样性(连接形成的多样性约为2 × 1011)。这种基因片段连接的不准确性使TCR的表达呈多样性, 以识别各种不同的抗原。正常个体在无抗原刺激时，TCR基因重排是随机的，因此正常人外周T细胞呈多家族、多克隆性特点。不同抗原(肿瘤、疫苗、病院微生物或者移植物等)刺激后，TCR V区基因可对该\抗原产生特异性识别，并使带有这类基因的 T细胞得到优势扩增，可用于分析不同 TCR V亚家族 T细胞的表达和利用。
图1 TCRβ基因结构示意图
图2 TCR重组过程示意图
锐博生物国内首推T细胞受体测序(TCR seq)，采用多重扩增的手段获取TCRβ的CDR3区域，结合高通量测序技术，结合生物信息学分析手段，分析VDJ重排的方式等，广泛应用于肿瘤免疫、自身免疫性疾病、器官移植免疫监测、疫苗注射免疫监测等领域。
技术特点
多重扩增：使用多组PCR引物对TCRβ的CDR3区域进行扩增，而非探针捕获
高通量：一次测序得到百万级别条数的序列信息
高准确性：从几个到几十万个拷贝的精确计数
高分辨率：可以精确检测至单碱基差异
重复性好：深度测序保证了检测的随机性，可不需技术重复
服务流程
生物信息学分析内容
标准信息分析
1. 去除污染序列
2. V, D, J, C mapping
3. CDRs 拼接碱基序列组成
4. Vβ所属亚家族
5. V-J 组合分布 (2-D, 3-D map)
6. CDR3长度分布
7. V-J组合频率、CDR3表达频率、多态性和长度分布
8. 对缺失的碱基、V-D、 D-J插入的碱基进行分析和统计，计算其频率分布