RAPD及SRAP、ISSR技术

一．RAPD技术简介

运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为RAPD(Random amplified polymorphic DNA，随机扩增的多态性DNA)。尽管RAPD技术诞生的时间很短，但由于其独特的检测DNA多态性的方式以及快速、简便的特点，使这个技术已渗透于基因组研究的各个方面。

RAPD技术建立于PCR技术基础上，它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为10聚体)为引物，对所研究基因组DNA进行PCR扩增。聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离，经EB染色或放射性自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增产物DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。二. SRAP技术简介

相关序列扩增多态性(Sequence—related amplified polymorphism，SRAP)是一种新型的基于PCR的标记系统，为显性标记，是由美国加州大学蔬菜系Li与Quiros博士于2001年在芸薹属作物开发出来。该标记通过独特的双引物设计对基因的ORFs(Open reading frames开放阅读框)的特定区域进行扩增，上游引物长17bp，对外显子区域进行特异扩增。下游引物长18bp，对内含子区域、启动子区域进行特异扩增。因不同个体以及物种的内含子、启动子与间隔区长度不同而产生多态性。该标记具有简便、高效、产率高、高共显性、重复性好、易测序、便于克隆目标片段的特点。目前已成功地应用于作物遗传多样性分析、遗传图谱的构建、重要性状的标记以及相关基因的克隆等方面。

三. ISSR技术简介

ISSR ( inter simple sequence repeat) 又称简单重复序列间扩增，是近年来发展起来的一类新型的分子标记技术。该技术根据植物基因组中丰富的简单重复序列设计单一引物,对基因组DNA进行扩增,利用了RAPD技术的优点和基因组中丰富的SSR序列信息,具有操作简单、可靠性强、重复性高、DNA模板用量少、不需预先设计引物的特点,可用来揭示样本间的遗传多样性。

四．客户提供：

★基因组DNA：

   ●至少15μL样品，浓度为50-100ng/μL；

   ●2%琼脂糖电泳检测有DNA主带，没有降解；

   ●DNA经过DNA纯化试剂盒或磁珠纯化；

   ●DNA需溶解在TE或灭菌的去离子水里；

   ●DNA溶解后，肉眼看不到杂色；

★植物材料：新鲜组织，叶片采用硅胶干燥后或干冰运输；

★动物材料：新鲜组织，无水乙醇封存低温运输；