Label-free

产品定义

蛋白质非标记定量技术（label-free）是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。

技术原理

非标记定量蛋白质组学已成为越来越重要的质谱定量方法，按照其原理主要分为两种：

[1]  Spectrum counts类的非标记定量方法：发展比较早，已经形成多种定量算法，但主要原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础，各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。

[2]  另一种非标记定量方法的原理是以MS1为基础，计算每个肽段的信号强度在LC-MS色谱上的积分，MaxQuant是领先的蛋白质组学定性定量算法，现在已经渐渐成为蛋白质组学领域内的标准解决方案之一。

实验流程

注释：“样品及实验预判”包括蛋白质定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析，对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。

使用仪器

Thermo Scientific Q Exactive

技术优势

蛋白质不需要进行标记，所需样品总量少，耗费低。

应用领域

疾病标志物筛选             作用机制研究

植物抗逆研究                药物作用靶点研究

特殊功能蛋白质筛选

样品要求

技术参考案例

[1]       Niemann M, Wiese S, et al. Mitochondrial outer membrane proteome of Trypanosoma brucei reveals novel factors required to maintain mitochondrial morphology. Mol Cell Proteomics. 2013; 12(2): 515-28.

[2]       Vanderschuren H, Nyaboga E, et al. Large-Scale Proteomics of the Cassava Storage Root and Identification of a Target Gene to Reduce Postharvest Deterioration. Plant Cell. 2014.

[3]       Cholewa BD, Pellitteri-Hahn MC, et al. Large-Scale Label-Free Comparative Proteomics Analysis of Polo-Like Kinase 1 Inhibition via the Small-Molecule Inhibitor BI 6727 (Volasertib) in BRAFV600E Mutant Melanoma Cells. J Proteome Res. 2014 Jun 9