产品名称：TonkBio cDNA 第一链合成试剂盒

英文名称：TonkBio First Chain cDNA Synthesis Kit

产品描述：TonkBio cDNA 第一链合成试剂盒是专门用于两步法RT-PCR的第一步，含有合成高质量第一链cDNA所需的所有成分，适用于后续的PCR、qPCR以及基因克隆。采用的是无RNase H活性的M-MLV逆转录酶，避免了第一链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解，具有高效的逆转录活性，适合合成长达9 k的cDN**段。

产品特点：优化配制了用于第一链cDNA合成反应的各种成分，试剂盒中的ToneScript M-MLV具有高效的逆转录活性，避免了第一链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解，具有高效的逆转录活性。适合后续的PCR、定量PCR以及PCR克隆，适用于各种PCR耐热聚合酶。

应用举例：反转录性

常见问题解析：

1、 没有RT-PCR产物或产量低

◆RNA模板降解。RNA 的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的。提取的RNA应进行电泳检测以确定其是否降解。同时RNA要避免多次反复冻融。

◆RNA模板纯度低。提取RNA的过程中，可能残留一些盐离子、试剂，如 EDTA、酚、胍盐、磷酸盐、多胺等抑制接下来的反转录反应。建议用75%乙醇（DEPC 水配制）仔细清洗RNA沉淀。

◆引物不合适。选择合适的引物，当RNA是细菌RNA或者是没有polyA尾的RNA要选择随机引物或者特异引物。

◆目的基因含有复杂二级结构或高GC含量。建议选择随机引物进行反转录。将反转录温度提高至55℃。

2、RT-PCR 产物比预期长

◆RNA 中很可能污染了DNA。真核生物基因组DNA中含有内含子，可能参与了 PCR扩增，可以在反转录之前对RNA进行DNaseI的消化。

3、阴性对照中有RT-PCR产物

◆阴性对照中有RT-PCR产物也表明有DNA的污染。在反转录之前对RNA进行DNase I 的消

同科生物简介：成立于2007年，是一家集研发、生产、销售和技术服务于一体专注于生命医学和生物技术领域的高科技企业。主营业务有科研产品、诊断试剂、分子诊断和技术服务等，主要服务于科研机构、大专院校、医院和工业等客户。

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