PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*是美国AAT Bioquest生产的用于检测ADP的试剂盒，ADP参与许多生物反应，例如蛋白激酶。 我们的ADP分析试剂盒可通过监测ADP的形成来普遍用于分析蛋白激酶反应，而ADP的形成与酶磷酸转移酶的活性成正比，并通过荧光法进行测量。 该试剂盒提供了一种快速，简单且均一的测定ADP形成或消耗的测定方法。 该测定是连续的，并且可以容易地适于自动化。 该套件很方便，需要最少的动手时间。 由于蛋白激酶与诸如癌症和其他增生性疾病，炎性疾病，代谢紊乱和神经系统疾病等疾病的广泛相关性，因此参与药物开发的研究人员对蛋白激酶很感兴趣。 大多数商业化的蛋白激酶检测试剂盒都是基于对磷酸肽形成或ATP缺失的监测。 百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的PhosphoWorks 比色法MESG磷酸盐检测试剂盒 *UV吸收*。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.运行激酶反应（20 μL）
2.添加ADP传感器缓冲液（20 μL）
3.添加ADP传感器（10 μL）
4.在室温下孵育15分钟-1小时
5.监控荧光强度

溶液制备

1.标准溶液

磷酸盐标准
向950μL去离子水或酶反应缓冲液中添加50μL1 mM KH2PO4（组分D），得到50μM磷酸盐标准溶液（PS7）。 取50μM磷酸盐标准溶液，并进行1：2连续稀释，以用去离子水或酶反应缓冲液连续稀释磷酸盐标准液（PS6-PS1）。

2.工作溶液

2.1将500 μL ddH2O加入小瓶MESG底物（组分B）。 涡旋混合均匀，得到MESG底物溶液。 注意：250 μl足够一块板。

2.2向小瓶嘌呤核苷磷酸化酶（PNP；组分C）中加入100 μL ddH2O。 涡旋混合均匀，得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液。

2.3将全部体积的MESG底物溶液和嘌呤核苷磷酸化酶溶液添加到分析缓冲液（组分A）的瓶子中，并充分混合以得到工作溶液。 将工作溶液放在冰上。 注意：此工作溶液在冰上至少可稳定4小时。 不建议将工作溶液冷冻进行其他测定。 为了获得理想的结果，需要紫外线透明的板或比色皿。 由于该测定法对Pi的敏感性很高，因此使用无Pi的实验室器具极为重要。

样品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ADP标准品和测试样品的布局。 SD = ADP标准（SD1-SD7，0.05至30 uM）; BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1.根据表1和表2提供的布局，准备磷酸盐标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 μL试剂代替50 μL。

2.将50 μL工作溶液添加到磷酸盐标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总测定体积为100 μL /孔。 彻底混合试剂。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 μL工作溶液，总体积为50 μL /孔。

3.在室温下孵育30分钟。

4.用酶标仪或分光光度计在360 nm处监测吸光度。 注意：对于需要总体积大于100 μL的比色杯分析，在测量吸收之前，应按比例将样品和分析试剂的体积相乘。