荧光定量PCR技术是普通PCR技术的改良和发展，它提高了普通PCR技术的特异性和准确性，能做到实时监控和准确定量，广泛应用于基础研究、临床检验、海关商贸检疫等各个领域。 1. 技术优势： (1) 灵敏度高，可以检测低拷贝的目的基因 (2) 高精度，PCR扩增阶段包括3个阶段：指数增长期，线性增长期和平台期，96个重复指数增长期表现出高精度，而平台期则变化差异较大 (3) 定量能力强，简单的流程就能得到高质量的定量数据 (4) 动力学范围宽，可以精确定量9个数量级的差异 (5) 速度快，节省时间和劳力，不需要电泳检测 (6) 安全，使用荧光染料发光，不用EB或放射性物质，极大降低对实验人员健康的威胁 (7) 重复性好 2. 服务流程 PCR引物、探针设计合成调试→标准品制作→样本核酸抽提反转录→PCR扩增检测→数据汇总初步分析 3. 检测方法 (1) SYBR Green Ⅰ 游离状态下的SYBR Green分子发出微弱的荧光信号，当与dsDNA双螺旋小沟区域结合时，则发出绿色荧光，可在520nm波长下检测荧光信号，荧光信号的强度与dsDNA数量呈正相关。 SYBR Green Ⅰ染料法的特点： 高灵敏度，低背景信号，操作简单，不影响酶促反应，价格便宜。 (2) 探针法：TaqMan荧光探针，MGB探针 TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等荧光基团，而淬灭剂则在3`末端，一般为TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA发出黄色荧光，BHQ1和BHQ2不发出荧光。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 TaqMan-MGB探针与普通TaqMan荧光探针相比具有更短的序列和更高的序列特异性，常被用于SNP分型的研究中，有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。 4. 客户需要提供 详细的实验要求，数据分析要求，基因名称（提供Genbank登录号），待测样本（清晰样品编号），保证样本质量。 5. 送样要求 (1) 组织样本在取样后，迅速放入Trizol或RNA保存液中； (2) 细胞请用培养基,Trizol或RNA保存液； (3) RNA保存液保存的样本可冰袋运输；其它保存条件请干冰运输。 6. 检测周期 常规检测任务2－3周内完成，具体时间根据要检测的基因和样本数而定 7. 报告内容 提供电泳图片，引物调试与样本扩增相关图片（扩增曲线/溶解曲线/标准曲线），定量PCR导出的原始数据，结果的初步汇总分析以及实验报告；