EST分析

公司客服：010-58717636     业务QQ1 ：807475538     业务QQ2：2625721894

市场部邮箱：biokitmarket@163.com(欢迎前来咨询)

服务概述

表达序列标签技术（EST，Expressed Sequence Tags）直接起源于人类基因组计划。但是，由于人类基因数量巨大，以及真核基因特有的复杂性（如内含子、外显子的区别、重复序列等），使得一次性不加选择地对基因组全长进行测序成为几乎不可能完成的工作。Venter等在1991年提出了表达序列标签（EST）技术。此技术以大规模cDNA测序为基础，即提取生物体的mRNA，反转录为cDNA并构建cDNA文库，进行序列测定；然后通过生物信息学手段得到全长的基因序列。通常EST序列位于一段cDNA的3’-端非翻译区，也可以在该cDNA中随机选取。利用EST技术克隆基因及功能分析，使克隆和定位新基因的策略发生了巨大变革。EST 自身的局限性集中体现在序列分析中的精确程度，另外还有由高丰度与低丰度序列之间的巨大差异造成的重复测定与漏测，所以建议在做EST分析前，最好构建均一化cDNA文库。

样品要求

1， 客户提供初始材料。材料要求新鲜、RNA无降解；样品量：组织（2~3g），细胞（10 8），总RNA量50~100μg（>0.3μg/μl）或mRNA量2~3μg（>0.3μg/μl）；最低总RNA量为2~3μg（>300ng/μl），最低mRNA量为0.2~0.3μg（>30ng/μl）。其余详见“文库构建”中的要求。

2， 若客户提供（均一化）cDNA文库，应提供文库评价的数据，包括库容量、滴度、插入片段的平均长度、重组效率等。

实验流程

                                             提取总RNA

↓

构建均一化cDNA文库

↓

单克隆大规模测序获取EST信息

↓

　EST序列信息处理和管理

↓

　　　　①　　　　　　　　②　　　　　　　　　　　　③

去除载体序列、宿主序列和      聚类分析、拼接                           数据库查询

重复序列
                                        ↓

生物信息学分析（基因注释及功能分析，表达谱分析等）

↓

                                 UNIGENE的挑选、扩增并纯化

↓

                                      点芯片及检测应用

完成时间

根据合同要求时间完成。

最终产品

   均一化cDNA文库及评价的数据（若由我们构建）；测序结果；序列信息处理结果；生物信息学分析结果；UNIGENE点制的芯片。

服务费用

询价