免疫共沉淀结合质谱技术CO-IP-MS

产品定义

免疫共沉淀（co-inmunoprecipitation, Co-IP）技术是逐渐成为研究蛋白-蛋白间相互作用主要方法和手段，以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来。是确定蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。纯化蛋白复合物凝胶电泳分离蛋白，应用Western blot或者质谱分析鉴定靶蛋白的结合蛋白。

应用领域

适用于纯化抗体靶向蛋白复合物，并进行定性及定量，从而研究蛋白互作及蛋白复合物动态变化。

技术优势

1 免疫共沉淀与质谱结合，不仅能验证已知蛋白的相互作用，而且还可以鉴定与目标蛋白互作的未知蛋白。

2 靶向特异性强，可直接鉴定到目标物相互结合蛋白

3 通过这种互作蛋白可能所影响到的某一信号通路，为生物研究提供一个新方向，为科研人员提供全新的实验思路。

使用仪器

TripleTOF 5600，TripleTOF 6600,Q-Exactive/HF, FUSION, LUMOS

可选择数据分析

    蛋白质/肽段鉴定及定量结果                  蛋白质GO分析及差异蛋白GO富集分析

    蛋白质KEGG Pathway通路分析              蛋白质相互作用分析（PPI）

样品要求

蛋白提取物：≥500 μg

细胞：≥106

组织：动物组织≥10mg,植物组织≥200 mg

体液：血清≥100μL，脑脊液≥200μL

技术参考案例

1.Fu B, Li S, Wang L, et al. The ubiquitin conjugating enzyme UBE2L3 regulates TNFα-induced linear ubiquitination[J]. Cell research, 2014, 24(3): 376-379.

2.Shi F T, Kim H, Lu W, et al. Ten-eleven translocation 1 (Tet1) is regulated by O-linked N-acetylglucosamine transferase (Ogt) for target gene repression in mouse embryonic stem cells[J]. Journal of Biological Chemistry, 2013, 288(29): 20776-20784.

3.Ohouo P Y, de Oliveira F M B, Liu Y, et al. DNA-repair scaffolds dampen checkpoint signalling by counteracting the adaptor Rad9[J]. Nature, 2013, 493(7430): 120-124.