技术服务详细描述

  基因表达分析 

甲基化PCR

简介：
    DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高度甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生。目前, 基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）和硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）。

技术原理：

1、MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列差异，设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物，结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开。这种方法灵敏度高，对DNA的质和量需要少。

2、BSP：甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变，用一对特异性引物扩增后测序，再与DNA原始序列比对确定甲基化位点。测序法克服了只能针对单个位点检测，并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点，可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测。

服务流程：
1、根据目的基因启动子序列设计相应引物；              
2、基因组DNA的提取和定量；
3、亚硫酸氢钠修饰基因组DNA；                               
4、修饰后DNA纯化回收；
5、 a.结合实时定量PCR的qMSP；       
b.BSP，对PCR产物进行测序并与未经处理的序列比较；
6、数据处理；
7、向客户提交数据分析结果与实验报告。
 

客户提供：
尽可能新鲜和足量的组织（≥50mg）、细胞样品（≥106）或全血（≥300μl），或直接提供纯化好的DNA（≥5μg/样品）。
我司提供：原始数据及实验结果和方法报告单。