离子交换层析，分手工和仪器两种。手工微柱有Bio-RaD和西班牙BIO SYSYEMS等多家公司产品，手工微柱操作受到人工因互影响，可能会洗脱不完全或过度洗脱，并受外界环境温度的影响，而某些红蛋白如HbF异常增加时，也会与糖化血红蛋白同时洗脱肉而使结果产生偏差。相应的仪器以英国DREWSCIENTIFIC公司DS5糖化血红蛋白仪为例(BIO-RAD公司DIASAT亦为同一产品)，采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱胎技术可全自动分离血红蛋白的变异体与亚型，除可测定糖化血红蛋白外，还可同时检测出HbS与HbC的存在与否，在计算糖化血红蛋白值时会自动扣除变异体产生和影响，从而使结果更为准确、可靠，CV值小于2%。同时该仪器配有专门的稀释溶血器，可直接进行全血操作，5分钟即可报告结果，并自动储存样品的检测结果，层析柱价格也较为低廉。适合于较多标本的医院检测。更大型的仪器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold，除可全自动测定糖化血红蛋白外，还可分离检测血红蛋白的600多种子变异体和亚型，用于地中海贫血等疾病的诊断

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