近来由于宠物对于人和家庭的重要性有越来越重要的趋势，为了能确保宠物与家庭成员的健康，本公司也提供宠物健康及疾病的基因检测服务。本公司拥有优秀的技术团队和最先进的设备，除了能提供最精确的检测，同时也能缩短检测的时间，让疾病能够及早发现及早治疗，并使兽医师能及早拟定治疗方针。一般疾病基因检测大都采用传统的PCR检测，本公司为了能让检测更快速精确，特别引进实时聚合酶连锁反应（Real-time PCR）技术，实时聚合酶连锁反应（Real-time PCR）的优点为实验时间可大幅缩短，整个反应时间约为一小时，也可在仪器屏幕上实时监测结果，且鉴定的专一性、敏感度及诊断准确性也较一般PCR方式为高。实时聚合酶连锁反应（Real-time PCR）技术可于动物临床疾病检测之应用。

实时聚合酶连锁反应（Real-time PCR）技术在动物临床疾病检测之应用

1. 前言

现今分子生物技术不断研发、创新与进步，聚合酶连锁反应(PCR)技术为此领域中最广泛使用之方法。PCR主要运用双股 DNA变性(denature)、引子黏合(Annealing)以及延伸作用(Extension)等三步骤之循环，连续增幅目标产物。目前在人类疾病、动植物的疫病虫害检测上，许多以PCR为基础之技术被广泛的应用，例如多重引子聚合酶连锁反应(Multiplex PCR)、巢式聚合酶连锁反应(Nested PCR)、反转录聚合酶连锁反应(RT-PCR)、反转录巢式聚合酶连锁反应(RTn-PCR)、逢机增幅多形性脱氧核醣核酸-聚合酶连锁反应(RAPD-PCR)、限制片段长度多形性-聚合酶连锁反应(RFLP-PCR)以及实时聚合酶连锁反应(Real-time PCR)等。其中Real-time PCR近年广泛被应用于各类疾病诊断，此技术除了大量缩短PCR反应时间外，仪器与技术亦不断创新进步，且达到兼顾准确性、敏感度与高效率等多项优点。

2. Real-time PCR与传统PCR之差异

Real-time PCR跟传统PCR不同之处在于前者是在PCR反应中加入荧光呈色，经由real-time PCR仪器的光源激发与侦测的光学系统，监测每一个反应过程中实时侦测荧光强度，荧光强度会随特定病毒或核酸量的多少而发生变化，藉此可以得到数据化的病毒核酸量；而后者仅有温控功能，必须等到反应结束后，再进行洋菜胶体电泳分析以及胶体染色。Real-time PCR方法以往基本配备包括：Real-time PCR仪器以及计算机配备，但现在随着科技发达，技术不断改良更新，Real-time PCR仪器已发展至不需外接计算机，触碰式接口与一键式操作让失误降至最低，可于仪器屏幕上实时监测实验结果，且精确度及灵敏度都优于传统PCR。

3. Real-time PCR的优缺点

Real-time PCR的优点为实验时间可以大幅缩短，整个反应时间约一小时内，也可在仪器屏幕上实时监测实验结果，且鉴定的专一性、敏感度及诊断准确性也较一般PCR方式为高。检测过程不需进行洋菜胶体电泳分析，也可避免多做这个实验所造成的污染及操作或判读误差，以提供更正确的结果。除此之外，Real-time PCR皆可精准定量，确定动物体内特定病毒或核酸的量，这对于动物疾病中的各种病原微生物(病毒、细菌、寄生虫)感染、慢性疾病或先天性基因异常所产生之疾病检测，特别具有意义。而传统PCR仅能用于定性分析，至多能达到「半定量(semi-quantitative)的程度。而Real-time PCR的缺点则是机器及反应耗材的费用相对较高，技术层面相对较高故造成目前在使用上无法达到普及化的主要原因，但目前本公司引进最先进的仪器与技术，更能为宠物疾病做出最正确的诊断。

4. Real-time PCR在检测临床动物疾病之应用

由于分子检测技术具有快速、高灵敏度与专一的特性，因此临床诊断发现可疑病例时，临床兽医师除了可藉由过往经验判断之外，现在可经由分子检测技术的协助，获得更精确的临床诊断。目前本公司使用Real-time PCR系统在动物临床疾病诊断上，此技术可以用来检测先天性基因异常、基因定位突变、病原微生物（细菌、病毒、寄生虫等）感染等。且此检测技术对疾病检测或鉴定相对快速，急件可于收件后两小时即可完成检测，确定检体之病原微生物种类，因此临床兽医师可参照检测结果尽快针对特定病原进行治疗。
1. 感染性的疾病：某些病毒、细菌、寄生虫、霉菌皆可使用Real-time PCR诊断，从临床检体、血液、尿液、脊髓液、鼻腔冲洗液或结膜拭子萃取核酸，将病原体基因定序、比对，然后利用上述核酸序列设计每一种特定病原的专一性引子对，利用PCR反应及荧光染剂(SYBR-Green)嵌合在目标产物上，而光学仪器侦测荧光反应，并将讯息显示在仪器屏幕上便可实时看到反应信息，这样便可以快速的侦测到病原体的存在，这项侦测技术在医院与学术研究单位已广泛使用。
2. 遗传疾病：因为PCR测定特异性的DNA序列，因此遗传疾病来自基因的变异可以测定出来，目前研究可以用于检测犬渐进式视网膜萎缩症(PRA)与猫体染色体显性多囊性肾病(Feline autosomal-dominant polycystic kidney disease; ADPKD)。

5. 结论

临床诊断是需历年经验累积与科学之结合，临床兽医师在日常检查诊断的过程中，难免遇到疑难杂症，此时可藉助科学的协助诊断，不但可以提升自我的诊断经验值与准确度，也可提升兽医师在畜主心目中的专业地位。目前分子检验技术中以Real-time PCR最具高效率以及利用荧光放大讯号侦测可增加其灵敏度，能够侦测含菌量或病毒体很少之检体，对于临床需求快速诊断，以及省时、省力之特质上，则具有相当大的重要性，所以，是一个临床上适切的诊断方法，或许也将会成为治疗效果的指标，有助于医疗诊断治愈之质量与推展。