服务内容：

●Agilent和Affymetrix平台的mirarray（芯片）筛选服务及后续的芯片数据分析及靶基因聚类分析

●过表达miRNA慢病毒服务

●抑制miRNA慢病毒服务

●靶基因功能验证实验

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一、microRNA技术概述

miRNA（microRNA）是一类长度约为20-24nt的内源性非编码RNA，广泛参与基因转录后调控活动，其中多数miRNA具有高度序列保守性、表达时序性和组织特异性。最近的研究表明，miRNA参与了各种各样的调节途径，包括细胞增殖与凋亡、生长发育、器官形成、造血过程、脂肪代谢、病毒防御等各种功能，具有重要的基因表达调控作用。

    现在主流的芯片平台是Agilent和Affymetrix，Agilent只检出成熟体，而Affy的芯片前体和成熟体皆检出，假阳性率较高，但Affy的容量相比Agilent的大很多。 汉恒生物（Hanbio）提供Agilent和Affymetrix平台的mirarray筛选服务及后续的芯片数据分析及靶基因聚类分析。

检测原理

1.针对Agilent miRNA芯片采用独特的茎环状探针设计；

2.miRNA成熟体3’端进行Cy荧光标记，这个新标记的C碱基将与探针序列中的G碱基杂交；

3.探针形成的茎环结构起到了稳定杂交体，并限制miRNA前体杂交(A)；

4.通过缩短形式的探针设计，降低杂交体稳定性，使多个探针的退火温度趋向 一致(B)。这种设计提高了杂交特异性和灵敏度。

技术优势

特异性高：通过特殊的探针设计有效区分miRNA成熟体和miRNA前体，并有效区分序列高度相似的不同miRNA；

灵敏度高：直接用Total RNA进行实验，无需miRNA分离过程，只需100ng的Total RNA即可用来进行标记实验；

样品适用范围广：各种新鲜组织、冰冻组织、FFPE组织、脱落细胞等均可进行实验；

动态范围广：检测丰度跨4个log，最高可达6个log。低至6000个拷贝的分子就可以检出；

芯片更新迅速、定制方便：数据来源于Sanger 数据库最新版本；对于人、大鼠、小鼠之外的动物物种，可以方便的通过eArray进行定制。

 介绍：

汉恒生物根据客户研究的miRNA，制定从芯片检测到病毒包装及功能验证实验方案。将miRNA或者miRNA inhibitor构建到慢病毒载体，生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

汉恒提供服务

    汉恒生物（Hanbio）已开发并完善病毒载体介导的microRNA过表达和封闭技术平台，可针对不同的microRNA不同的实验要求为客户提供定制服务。您也可直接购买我们已经构建好的microRNA病毒颗粒或病毒载体。

●过表达miRNA慢病毒服务

    从miRbase上调出pri-mir序列，将成熟miRNA、pre-miRNA或者pri-miRNA构建到慢病毒过表达载体中，其中pri-miRNA（含侧翼序列）的方式由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是应用最为广泛的方法。

●抑制miRNA慢病毒服务

    miRNA抑制剂(miRNA inhibitor)表达后则高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA，形成稳定的复合物，阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制，上调miRNA靶标基因的表达。构建mir的下调即封闭，主要的技术是sponges技术。将若干段连续mir成熟序列互补序列串联，使之在细胞内表达，吸附目标microRNA，所以称之为sponges（海绵）。