免疫组化实验-免疫学服务 -技术服务-生物在线

产品名称：免疫组化实验

英文名称： Immunohistochemistry of the experiment (paraffin-embedded tissue processing)

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武汉博士德生物工程有限公司

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石蜡组织标本处理过程

1．取材：将动物（如大小鼠）断颈处死后迅速取出所要组织，然后裁成大小为(1cm×1cm×0.5cm)剔除组织上的脂肪和钙化，将组织放入PBS缓冲液中洗涤（直至组织上无血渍为止）

2．固定：将组织置于4%多聚甲醛固定液中4℃固定，固定时间和组织厚度成正比（每1mm一小时）

3．脱水：固定后的组织经PBS缓冲液洗涤后（浸泡30分钟×3次）放入乙醇中4度剃度脱水

1) 70%乙醇 4℃ 3～4h

2) 80%乙醇 4℃ 3～4h

3) 90%乙醇 4℃2～3h

4) 95%乙醇Ⅰ 4℃ 2～3h

5) 95%乙醇Ⅱ 4℃ 1～2h

6) 100%乙醇Ⅰ 4℃ 1.5h

7) 100%乙醇Ⅱ 4℃ 1.5h

8) 二甲苯Ⅰ 4℃ 0.5～1h

9) 二甲苯Ⅱ 4℃ 0.5１～1h

10) 石蜡Ⅰ 60℃ 1h

11) 石蜡Ⅱ 60℃ 2h

　　以上全过程为18-24h，也可在室温内使用自动脱水机代替。如组织块小，直径小于0.5cm，可用快速石蜡包埋切片，全过程只需4h左右。有些组织在切片时易碎（如肝脏），在脱水时可适当缩短脱水时间

4浸蜡：将组织浸入液态石蜡中（2小时×2次）严格控制浸蜡温度（60—65℃为宜），防止温度过高导致组织蛋白丢失。

5模具包埋：待蜡完全凝固后4℃保存

6切片：要求刀片锋利，切片时尽量避免刀痕与皱折，切片投入50℃左右水浴中，若展片困难时可适度加入几滴乙醇，待完全展开后将其黏附在玻片中央。

7烤片： 60℃烤片30分钟，或37℃恒温箱过夜..烤完后切片标本可长期保存