miRNA整体解决方案

一   miRNA表达研究

定量检测组织或细胞样本中的miRNA是功能研究的第一步，有助于人们进一步了解 miRNA与疾病发生及发展的关系，以便为疾病的早期诊断提供新的思路。本公司主要通过microRNA芯片、microRNA-Seq、microRNA PCR 芯片、实时定量PCR、原位杂交等多种方法检测miRNA的表达情况。为您提供最优质的、全方位的技术服务。

1、micro RNA-seq ：

小RNA是一类重要的体内调节分子，主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是诱导基因沉默，参与基因转录后调控，从而调节细胞生长、分化，以及个体发育、生殖等重要生物学过程。小RNA测序技术采用胶分离技术，收集样品中18-30nt的RNA片段，利用高通量测序技术，一次性获得单碱基分辨率的数百万条小RNA序列信息，依托强大的生物信息分析平台，鉴定已知小RNA，并预测新的小RNA及其靶标基因。

2、 表达谱芯片：

英拜生物为您提供全基因组表达谱芯片技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，英拜的芯片技术服务人员就可为您完成全部实验操作，并提供完整的实验报告。同时，根据您的研究需要，英拜还提供基因网络关系分析、分子标志物筛选分析等数据挖掘服务。

英拜生物全基因组表达谱芯片主要实验流程
1. 样品RNA抽提：
2.  RNA质量检测：
3. cDNA/aRNA样品合成和标记
4. 标记效率质量检测：
5. 芯片杂交：

6. 图像采集和数据分析：
7. 提供实验报告 包括详细的实验方法以及芯片实验数据和图表。

3、microRNA实时定量PCR检测服务

实时荧光定量PCR技术是在普通PCR反应体系中加入荧光试剂，利用荧光信号实时检测PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。成熟miRNA是由21-25个核苷酸组成的小RNA，由于长度太短，不能通过传统的实时定量PCR进行检测。本公司通过特殊设计的茎环结构的反转录引物，配合实时定量PCR引物及探针可以精确检测微量样品中miRNA表达水平，也可以用终点PCR法定性检测。

本公司为您提供miRNA 实时定量PCR技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，本公司专业的技术服务人员就可替您完成miRNA实时定量PCR实验操作和数据分析，提供给您完整的实验报告，为您节省大量的时间和精力。

4、microRNA原位杂交
RNA原位核酸杂交(RNA nucleic acid hybridization in situ)又称RNA原位杂交(RNA in situ hybridization RISH)。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交)，所形成的杂交体(Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的RNA分子。现在探针标记技术有生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶和荧光素。

二、靶基因预测及验证

1、miRNA芯片，microRNA-Seq数据深度发掘分析

a) 芯片，测序数据聚类分析

b) microRNA靶基因预测“TargetScanS”， “miRanda (miRBase)”，“miRGen”等数据库

预测差异microRNA的所有靶基因。

c) 靶基因GO分析

根据Gene Ontology数据库对靶基因进行功能显著分析，从而筛选显著性功能的靶基因。

d) 靶基因pathway分析

根据KEGG数据库对靶基因进行Pathway分类，并进行显著性分析从而得到显著性的Pathway分类。

e) 构建的MicroRNA与基因的调控网络

通过构建MicroRNA与基因的调控网络，可以从中找出hub基因及hub microRNA.

f) microRNA 、靶基因、转录因子调控网络

microRNA也会受到转录因子调控造成表达差异，通过系统研究转录因子与基因间的调控关系，可以为寻找重要转录因子及重要基因提供线索。

g) microRNA启动子分析及甲基化位点分析

当microRNA研究日趋火热，越来越多的研究者开始关注microRNA本身甲基化变化。MicroRNA基因的甲基化变化也是造成microRNA表达差异的重要原因。

2、microRNA 靶基因验证实验　

当前，microRNA对靶基因的功能研究十分热门。利用荧光素酶报告基因检测实验寻找或验证microRNA对靶点作用性是不可或缺的实验技术。英拜生物可为您提供microRNA报告基因载体构建服务，并可进一步为您提供荧光素酶报告基因检测实验服务。您只需要提供目的microRNA靶位点序列，本公司专业技术服务人员就可替您完成载体构建，为您节省大量的时间和精力。

下图为microRNA-reporter载体表达框架示意图，具有多克隆位点，方便插入目的靶点序列。psiCHECK-2载体用于终点法的细胞裂解物检测，包含萤火虫荧光素酶基因，使海肾荧光素酶的表达水平归一化，令该系统更可靠、重现性更好。使用psiCHECK-2载体时，无须通过共转染进行归一化。
        

 
英拜生物microRNA报告基因实验流程：

microRNA靶点的预测

利用Targetscan,miRanda,PicTar软件得到目的microRNA的预测靶点序列(客户提供)。

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