平行检测成熟miRNA和miRNA前体。
使用miRNeasy Mini Kit从HeLa S3细胞中纯化总RNA。使用miScript II RT Kit及附带的miScript HiFlex Buffer制备cDNA。在real-time PCR中，使用miScript Primer Assay对成熟miRNA进行定量，使用miScript Precursor Assay对前体miRNA进行定量。使用针对RNU6-2的miScript PCR Control进行标准化。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行real-time PCR。使用miScript PCR System，在real-time PCR平行反应中高效定量成熟miRNA及其前体miRNA。
性能
miScript Precursor Assays可准确检测miRNAs前体，可用于需同时检测miRNAs前体和成熟miRNAs的实验（参见"Parallel detection of mature and precursor miRNA"）。
原理
miScript PCR System配合SYBR Green-based real-time PCR，灵敏和特异性地检测并定量miRNA。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA和后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。
使用miScript PCR System进行miRNA前体检测和定量，需要以下组件：
miScript II RT Kit，可简单、单步合成cDNA。单个cDNA合成反应可用于检测数以百计的miRNAs。双缓冲体系满足使用real-time PCR进行miRNA定量的独特要求。
miScript SYBR Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。如需检测miRNA前体，无需使用miScript Universal Primer。
miScript Precursor Assay，包含miRNA前体特异性正向和反向引物，配合miRBase中的最新信息，检测miRNA前体。miRNA前体检测可与成熟miRNA（使用miScript Primer Assay检测）和mRNA（使用QuantiTect Primer Assay检测）检测同时进行，使用相同的cDNA样本。miScript Universal Primer不用于检测miRNA前体。
miRNA前体研究
miScript Precursor Assays包含miRNA前体特异性正向和反向引物，靶向作用于研究中的miRNA前体的茎环序列。miScript Precursor Assay靶向于初级miRNA（pri-miRNA）和miRNA前体的茎环序列，因此miScript Precursor Assays可同时定量初级miRNA和miRNA前体。miRNA前体检测可用于miRNA生物研究、调控和功能研究。不同miRNAs的成熟和miRNA前体水平各有不同。另外，在不同条件和组织中，成熟miRNAs可从不同的miRNAs前体中表达。
操作流程
miRNA前体检测实验中，使用miScript II RT Kit中的miScript HiFlex Buffer，通过逆转录反应制备cDNA，作为real-time PCR的模板。Real-time PCR配合miScript Precursor Assay和miScript SYBR Green PCR Kit中的QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix进行。
应用
miScript Precursor Assays作为miScript PCR System的一部分，用于miRNA前体的检测。
