一、简介 NanoDrop 2000 超微量分光光度计是NanoDrop 的最新产品，应用液体的表面张力特性， 样品体积只需要0.5~2ul，在侦测台上，经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、 高浓度、免石英管、免毛细管等耗材侦测吸收值的优点。它使用高能量氙灯（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm 的全光谱侦测，且不需要暖机，开机后立即使用。搭配高感 度CCD array 侦测器，侦测吸收值可高达300Abs（dsDNA 浓度2~15000ng/ul），大部分纯 化后的核酸几乎都不需要稀释即可侦测。 待测样品的均质性是NanoDrop 2000 的最高要求，一般核酸、蛋白质样品能在侦测前以 vortex mixer 震匀为最佳，若无vortex mixer 也应以pipette 吸放数次混匀。若担心genomic DNA 可能因前述动作而断裂，则改以55 ?C 加热约一分钟，使样品在侦测前呈现均匀状态， 以确保2ul 具有代表性。 侦测时选择不同侦测模式，可以得到最快速的结果： ● Nucleic Acid – 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm 吸收值（换算成10mm 光径吸收值）、 260/280 ratio、260/230 ratio 及核酸浓度。 ● UV-Vis – 190~840nm 间所有波长的吸收值及光谱（以1mm 光径吸收值呈现）。 ● A280 蛋白质定量法– 280nm 吸收值（换算成10mm 光径吸收值）、260/280 ratio 及蛋 白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质，须具有已知的质量消光系数（mass extinction coefficient）方可计算。 ● BCA、Bradford 及Lowry – 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果，自动画出标准曲线 并计算R square，待测蛋白质浓度。 * 蛋白质侦测模式目前提供BCA、Bradford 及Lowry 三种常见定量呈色剂，因呈色剂随时间 会逐渐加深，使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品，在最佳时间内完成侦测， 以得到良好的标准曲线。每个标准曲线最多可有七个标准品，每个标准品最多可做五重复。 * 测蛋白质时样品体积需使用2ul，每个样品侦测后需以labwipe 擦拭15~20 回，以避免 呈色剂与蛋白质的残留。 二、技术参数： 1、波长范围: 190-840nm； 2、波长精度: 1nm； 3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)； 4、其它: 1mm 光程长度（可自动调整到0.05mm）； 5、检测下限：2ng/μl（dsDNA）； 6、检测上限：15000ng/μl（dsDNA）； 7、吸光率精确度：0.002 absorbance (1mm 光程)； 8、吸光率准确性：2%(at 0.76 at 257 nm)； 9、吸光率范围：0.02-300 (相当于10mm 光程)； 10、核酸检测周期：< 5s； 11、体积：14cm×20cm。 三、使用方法举例： dsDNA：在主画面点选Nucleic Acid，计算机与仪器自动完成联机。依照DNA 所溶于之液 体准备该溶液（务必确认DNA 溶于二次水、TE buffer 或哪一组kit 的elution buffer）取 出1.5 ul 点在侦测台上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉选Sample Type 选DNA-50， 在Sample ID 位置输入样品名称，将样品混匀，取出1.5 ul 点在侦测台上，放下上臂后再 按Measure。 四、结果整理： NanoDrop2000 软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处，若未指定，则档案会存在上一 个使用者的档案内。 五、注意事项： 1、侦测后立即使用拭镜纸（Kimwipe 类）擦拭台面。先取一张将上下台面的液体吸走，再 将此laboratory wipe 吸过样品的面反折到内部，折迭四次后以单方向多次擦拭台面（DNA 擦 5 次，Protein 擦20 次）。 2、同一滴液体只能做一次侦测，欲重复定量同一样品，请擦掉前一滴，重新取出一滴进行 侦测。 3、基本上核酸样品可使用1~2ul 做测量，随各液体体积特性之不同会有不同体积需求，原 则上不超过2ul。并请使用2ul pipette 避免体积不足导致液柱无法完整形成。唯蛋白质 样品因呈色剂与蛋白质本身特性，务必使用2ul 进行侦测。 4、当软件跳出错误讯息时，请详细阅读并依指示进行障碍排除。最常发生的情形是在侦测 过程液柱并未正确形成，软件会出现以下讯息。可先用肉眼观察液柱是否未完整连接上下 台面，或样品内有泡泡，将上臂拉起后，擦掉该滴样品，再重新进行侦测，必要时可将样 品体积加大至2ul。 5、不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之样品，其它无腐蚀性之液体皆可使用。 六、日常与定期维护： 1、平时保持台面及仪器本身清洁。 2、定期校正。