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肽探针扫描技术(交叠合成多肽的方法)

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   抗原肽抗体的结合反应中,抗体参与结合的部位称抗体的对位(paratope),抗原参与结合的部位以前多称为抗原决定簇,现在称为抗原的表位(epitope)。抗原表位有两种分类方法:一是按与抗原受体细胞结合不同,分为B细胞抗原表位和T细胞抗原表位。另一是按表位结构不同分为连续性抗原表位和不连续性抗原表位。前者又称线性表位,是由肽链上顺序连续的氨基酸组成;后者又称构象型抗原肽表位,是由那些空间邻近但顺序上不连续的氨基酸组成。

表位是蛋白质抗原性的基础。正确而具体地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、定点改造蛋白质分子以降低蛋白质药物的免疫原性,设计无毒副作用的人工疫苗以及免疫干预治疗等有积极的意义。
  80年代以来,由于免疫学理论、基因工程、蛋白质工程的发展和固相多肽合成技术、生物物理技术、免疫检测技术以及计算机技术的广泛应用,使蛋白质抗原表位的研究方法和思维方法有了新的进展,发现了一些适应于蛋白质抗原表位研究的实验检测和理论猜测方法。

 

肽探针扫描技术(交叠合成多肽的方法)

  采用合成肽来检测蛋白质的抗原性始于1968年,但由于这一技术的繁琐,一直未能在蛋白质抗原表位的研究中得以发展。80年代,由于多肽固相同步合成技术的突破,使得蛋白质抗原表位研究有了突飞猛进的发展。
  在肽同步合成技术中两个重要的技术为:
  (1) 1984年,Houghten发明的茶袋(tea-bag)技术,成为第一代多肽同步合成技术。该法在一个约3cm×4cmbag中合成一条肽链。在合成过程中,只有当特定的氨基酸与肽链缩合时,各个bag分开单独操纵,而脱保护和洗涤时均是将所有的bag放于一个聚乙烯瓶中同步操纵完成,大大简化了合成过程。随着该技术的应用,人们进一步改进这一过程使其自动化,成为第二代贸易化的多肽同步合成技术仪。这种仪器主要有可在XYZ轴方向上自由滑动的两根针组成。一根针负责吸进试剂和保护的氨基酸,另一根负责吸出试剂。
  (2) 1985年,Geysen发明了聚苯乙烯棒(pin)技术。多肽合成过程与茶袋技术类似,只是该过程在一个聚苯乙烯棒上进行(4mm的直径,40mm)。该棒洗涤完全并可重复使用。它最大的特点是棒上的肽可直接转进酶标板中,进行ELISA检测。
  所谓肽扫描技术是应用上述肽合成技术合成连续的重叠的57肽。将这些合成的肽与相应的抗体反应,分析检测结果,以确定阳性反应片断。
http://www.ontoresinc.com/ 这一技术要求有明确的抗原的一级结构,并且检测结果为抗原线性表位。该法应用广泛,已研究抗原表位的蛋白有HIVgp41、寄生虫蛋白、烟草花叶病毒(TMV)Fy6蛋白、鸭肝炎B病毒(DHBV)等。