总RNA提取试剂盒

操作步骤： 

1.  样品处理： 

 a.  植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 

 b.  动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 

 c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。

 d.  细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。 

 e.  血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟， 10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。  

2.  将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 

3.  向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。 

4. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。 

5.  吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul  洗柱液，室温放置2分钟，2-8  12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。 

6.  第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8  12000rpm ℃ 离心2min，弃废液。  

7.  向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8  12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。  

8.  向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8  12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。 

9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。 

10.  将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min

即得到RNA。 

注意事项： 

1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。 

2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。 

相关产品：

 R1600  DEPC 处理水 

 P1011  酚：氯仿：异戊醇＝25： 24： 1 （PH<5.0）        

  R1050   5×RNA Loading Buffer                         

 SR0020 RNA wait(非冻型组织 RNA 保存液) 

 M1010  10×MOPS 缓冲液

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参考文献：

《Roles of β-catenin, TCF-4, and survivin in nasopharyngeal carcinoma: correlation with clinicopathological features and prognostic significance》 作者:Pei-Ying Jin, Zi-Hui Zheng, Hong-Jie Lu, Jing Yan, Gui-Hong Zheng, Yuan-Lin Zheng, Dong-Mei Wu and Jun Lu 期刊:Cancer Cell International 影响因子:3.439 PMID:30867651