实时定量PCR检测服务
产品名称： 实时定量PCR检测服务
英文名称： qPCR
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产品价格： 120元
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南京海普乐生物科技中心
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一．TaqMan探针法
针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间的PRET，发出荧光。通常用于少量SNP位点分析（见图1）。
针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间的PRET，发出荧光。通常用于少量SNP位点分析（见图1）。
图1 某SNP位点分析结果 A.纯合(G/G) B.杂合(G/T)
二、SNaPshot法
该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析（见图2）。
图2 人线粒体22个SNP位点的SNaPshot实验结果
三、Mass Array法
MassARRAY分子量阵列技术是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具，通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合，实现基因分型检测。基于MassARRAY平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高达40重的PCR反应和基因型检测，实验设计灵活，分型结果准确性高。根据应用需要，对数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时，MassARRAY具有最佳的性价比，特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证，或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。原理图如下（图3）:
四、LDR法
当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列完全互补，并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应 TaqDNA连接酶的连接特性。原理图如下（图4）：
五、各方法学比较
| 分型技术 | 适宜检测的总位点数 | 适宜检测的样本数量 | 分型平台 | 准确率 | 备注 |
| taqman探针法 | 任意位点数 | 〉1000个样本 | ABI7900 | 99.9% | 公司可代合成taqman-MGB探针 |
| SnapShot法 | 〉5个位点 | 任意样本数 | ABI3730 | 99.9% | 免费提供引物 |
| M assArry | 〉20个位点 | 样本书最好为380的倍数 | Sequenom | 95% | 免费提供引物 |
| LDR | 任意位点数 | 大于200个样本 | ABI3730 | 99% | 免费提供引物 |
六、服务承诺
公司承诺，在保证质量的基础上，提供市场最低的价格！欢迎来电咨询！
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