Real Time PCR检测技术服务
产品名称: Real Time PCR检测技术服务
英文名称: RT PCR
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广州朗日生物技术有限公司
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01 服务项目
a 绝对定量
b 相对定量
c RNAi干扰效果确认(siRNA的筛选)
d 定性分析(SNP分型解析等)
02 检测方法
SYBR Green Ⅰ嵌合染料法、TaqMan 探针法、Cycling探针法等。
03 Real Time PCR装置
使用美国STRATAGENE公司的 Mx3000PTM实时荧光定量PCR仪。
一、
1. 绝对定量
绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品,使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后,对未知浓度的检测样品进行绝对量(起始拷贝数)分析。
实验例子:对于人的IL-22R1基因在上皮细胞中的表达情况进行绝对定量。
Target:Human IL-22R1
扩增长度:120bp
朗日使用的实验仪器:Mx3000PTM实时荧光定量PCR仪或ABI公司的ABI7300仪
2. 相对定量(mRNA表达量分析)
基因表达研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量,通过对参比基因的实时检测,可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA表达量误差进行校正,真正达到在严格意义上对样品之间的m RNA表达差异进行分析的目的。
实验例子:通过实时荧光定量PCR的方法,采用SYBR Green Ⅰ嵌合染料法,以GAPDH为内参基因,对于COL