2019 年 11 月 28-29 日，中国农业科学院兰州兽医研究
所口蹄疫防控技术团队先后报告有 4 名学生布鲁氏菌病
血清学阳性 [1]。随着检测范围的扩大，截至 2020 年 11
月 30 日，当地累计检测 79357 人次，重复检测 10786 人
次，实际检测 68571 人，经省疾控中心复核确认，抗体
阳性人员 10528 人 [2]。
经专家组调查，2019 年 7 月至 8 月，中牧兰州生物药厂
在兽用布鲁氏菌疫苗生产过程中使用过期消毒剂，致使
生产发酵罐废气排放灭菌不彻底，携带含菌发酵液的废
气形成含菌气溶胶，扩散后导致人体产生抗体阳性 [3]。
布鲁氏菌病简介
布鲁氏菌病 ( 简称布病 ) 是由布鲁氏菌引起的一种变态反
应性人畜共患传染病，其主要感染牛、羊、猪、犬、鹿等
哺乳动物。在我国大部分地区羊是主要感染源，其次是
牛和猪。布鲁氏菌可以通过破损的皮肤、黏膜、消化道
和呼吸道等途径传播。染疫的家畜是人间布病的主要传
染源，人由于接触患病的牲畜及其产品或其污染物而感
染布病。布病主要损害人、畜的生殖系统和关节，对畜牧
业的发展以及人类健康产生了较大的危害。目前布病是
《 中华人民共和国传染病防治法 》规定的 35 种传染病
中的乙类传染病，并被列为二类传染病。
布鲁氏菌病现行诊断方法及比较
由于布病的发生、发展和转归比较复杂，其临床表现多
种多样，很难以某一种症状来确定诊断。对布病的诊断，
需要结合患畜或病人的流行病学史、临床症状和实验室
检查等情况来综合诊断。及时、准确地诊断布病是控制
和根除布鲁氏菌病的关键。现如今，我国对于动物和人
类布病的实验室诊断方法大体分为两类：一类是以检测
布鲁氏菌抗原免疫反应为主的血清学诊断，另一类是证
明病原体存在的病原学诊断，具体的诊断方法见下面表格
1 和表格 2。
TECHNICAL NOTE
布鲁氏菌病诊断的新方法
—荧光偏振技术
表格1 动物布病实验室诊断方法[4]
| 初筛试验 | 确诊试验 | |
| 血清学诊断 | 虎红平板凝集试验(RBT)(GB/T 18646) 全乳环状试验(MRT)(GB/T 18646) 间接酶联免疫吸附试验(ELISA) 荧光偏振试验(FPA)* | 试管凝集试验(SAT)(GB/T 18646) 补体结合试验(CFT)(GB/T 18646) 竞争酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 病原学诊断 | 显微镜检查 细菌分离培养 | PCR 细菌鉴定 |
表格2 人类布病实验室诊断方法[5]
| 初筛试验 | 确诊试验 | |
| 血清学诊断 | 虎红平板凝集试验 (RBT) 胶体金免疫层析试验 (GICA) 酶联免疫吸附试验 (ELISA) | 试管凝集试验 (SAT) 补体结合试验 (CFT) 抗人免疫球蛋白试验 (Coomb′ s) |
| 病原学诊断 | 布鲁氏菌培养物涂片革兰染色检出疑似布 鲁氏菌 | 从病人血液、骨髓、其他体液及排泄物等任一病理材料 培养物中分离到布鲁氏菌 |
诊断布鲁氏菌病的“ 金标准 ”普遍认为是分离和鉴定病
原，而布鲁氏菌在体外生长非常缓慢，一般需要培养几天
甚至数周才能出结果，并且该试验需要在生物安全三级
实验室，由经验丰富的技术人员来完成，所以该试验不
适合现场的即时诊断或者疫情需要控制时的快速诊断。
PCR 方法因其具有速度快、灵敏度高和安全等优点，越
来越多的被应用于人类和动物的感染诊断，但是布鲁氏
菌 PCR 检测在不同实验室之间表现不一致，对样品制
备程序、基因组靶标的选择、检测技术等重要技术方面
还没有形成标准化 [6]。与培养法和 PCR 法相比，从技术
角度来看，血清学诊断方法比较经济和相对简单，更适
合进行大规模的筛查和诊断，特别是在流行地区。传统
的血清学诊断方法也有各自的优缺点，如试管凝集试验
(SAT)、补体结合试验 (CFT) 等耗时较长、方法繁琐且判
断较为困难，结果判定非常依赖于技术人员的经验；虎
红平板凝集试验 (RBT) 虽然操作简单，几分钟内就能得
到结果，但它的高灵敏度对接种疫苗的动物会产生假阳
性 [7]，在交叉反应细菌感染的患者中也会产生假阳性反
应 [7]；酶联免疫吸附试验 (ELISA) 虽然具有较高的特异性
和敏感性，但试验过程需要多次洗涤和孵育，对操作人
员专业要求高且步骤耗时较长。虽然这些不足在很大程
度上可以通过联合使用多个血清学试验来克服，但人们
一直在寻求一种快速、简便、经济且更准确的布鲁氏菌病
检测方法。
新兴的布病检测方法——荧光偏振试验
(FPA)
1. 荧光偏振试验 (FPA) 的原理
荧光偏振试验 (FPA) 是一种抗原 / 抗体相互作用的简单
技术，该试验基于物理原理：在溶液中，分子的旋转的
速度与其质量有关。小分子的自旋速度较快，从而使光
快速去极化，测得的偏振值较低，而大分子的旋转速度
较慢，因此对光的去极化更少，测得的偏振值较高。FPA
以毫偏振单位 (mP) 来衡量去极化的程度。在测试期间，
将血清样品与被荧光染料标记的抗原小分子孵育，在布
鲁氏菌属的抗体的存在下，形成了大的荧光复合物。在阴
性样品中，抗原是未结合的状态，与布鲁氏菌属阳性样
本相比，这些较小的抗原分子旋转得更快，因此引起光
的更大去极化。
荧光偏振技术原理
2. 荧光偏振试验 (FPA) 的工作流程
该试验操作很简便，将试剂盒提供的阳性对照、阴性对
照及待检血清加入到 96 孔纯黑色微孔板中，再加入样品
稀释液对各样品进行稀释，接着在 MD 荧光偏振仪上读
取对照品和样品的空白值，之后加入示踪剂 ( 荧光染料
标记的抗原 ) 并混合孵育，然后再次在 MD 荧光偏振仪
上读取试验值。在 MD 荧光偏振仪的 SoftMax Pro 软件
里，空白值和试验值均包括垂直和水平两个方向上的偏振
光强度，应用试验值减去空白值之后的 Delta FP 值来计
算毫偏值 (mP)，mP 值的计算公式如下：mP = [(S - P*G)/
(S + P*G)]*1000，其中 S 是水平方向上的 Delta FP 值，P
是垂直方向上的 Delta FP 值，G 是荧光测量路径的校正
因子，在 SMP 软件中 G 因子可以通过计算或者手动方式
来进行调节 [9]。最后用样品的 mP 值减去阴性对照平均
mP 值得到的 Delta mP 值，再根据试剂盒给出的截断
值进行结果判定。上述的测试程序、数据分析和结果判
定都能够在强大的 SoftMax Pro 软件中完成，并能够生
成、打印和导出 PDF 格式的试验报告，而且报告格式支
持个性化定制。
目前，国内已有动物布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测试剂
盒，进口试剂盒选择种类较多，包括动物和人的布鲁氏
菌病荧光偏振抗体检测试剂盒。
3. 荧光偏振试验 (FPA) 的特点
荧光偏振试验 (FPA) 作为新兴的布鲁氏菌病检测方法，
事实上它在人类医学中已经使用了很多年 [7]。世界动物卫
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程序设置 结果判定
生组织 (OIE) 在 2016 年批准了 FPA 法用于牛布病的验证
诊断以及羊和猪布病的检测 [8]，并且欧盟和美国农业部
也批准 FPA 法用于各国进出口贸易时牛群的检测。在我
国，荧光偏振试验 (FPA) 也在现行的《 国家布鲁氏菌病
防治计划 (2016-2020 年 )》中被列为动物布病的初筛试
验。
它是一种均相检测方法，整个试验都在溶液中进行，没
有分离和洗涤步骤，因此非常快速，可以在实验室或现场
进行。与前述的传统血清学诊断方法相比，荧光偏振试
验 (FPA) 操作简便，能够快速给出结果 ( 几分钟内 )，在
实验室和仪器之间具有高度的可重复性。整个测试都是
在荧光偏振仪上进行，试验结果很客观，减少了凝集试
验结果判读时易发生的人为错误和可变性。此外，传统
血清学检测方法的抗原大都是布鲁氏菌细胞膜上的光滑
脂多糖 (S-LPS)，而 FPA 的抗原分子使用的是光滑脂多
糖 (S-LPS) 中最具有免疫原性优势的 O- 多糖 (OPS)，这
使得 FPA 法能够区分免疫动物和自然感染动物，疫苗免
疫后动物体内残留的抗体滴度能够被检出，抗体水平非
常低，而自然感染动物体内抗体水平高。基于以上优点，
荧光偏振试验 (FPA) 很适合大规模布鲁氏菌病的筛查和
检测，值得推广