基本原理
化学发光(Chemiluminescense)是A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。因化学反应过程中伴随光辐射现象,故称为化学发光。在生物学领域常被用来检测蛋白质与DNA,反应过程中不需要紫外光等激发光源,是依靠HRP或AP等特定的酶与底物结合而推进反应的发生。通常产生的光辐射非常微弱,光信号不易采集。即使对反应过程进行连续曝光,但因成像质量不佳,而无法进行准确的定量分析。
现在,随着CCD成像技术的不断完善,使得对微弱信号的灵敏度大大提高,因此对化学发光结果的定量分析已不再是一件难事。法国VILBER公司生产的Fusion成像系统可以为化学发光用户提供最好的曝光图片,再结合Bio-1D软件强大的分析功能,可为用户提供最准确的定量分析。
应用展示
1.ELC Western blot
样本:带有过氧化物酶二抗标记的鼠免疫球蛋白
方法:Western blot / PVDF膜
底物:ECL
曝光时间:5分钟
仪器:Fusion FX5
2.CDP Star—Dot blot
样本:地高辛标记的DNA探针与Fab片断杂交样本
方法:Dot blotting / PVDF膜
底物:CDP Star
曝光时间:1 分钟
仪器:Fusion FX7
3.Luciferase assay
样本:荧光素酶(Luciferase)检测样本
方法:Petri dish
底物:荧光素
曝光时间:3 分钟
仪器:Fusion FX5