PKMYT1基因属于WEE激酶家族,包括PKMYT1,WEE1 G2检查点激酶(WEE1)和WEE2卵母细胞减数分裂抑制激酶(WEE1B)。它参与细胞周期蛋白依赖性激酶1 (CDK1)-细胞周期蛋白B1复合物的调节,也称为有丝分裂促进因子(MPF)通过磷酸化Tyr15和Thr14。PKMYT1的这种磷酸化可以对MPF产生抑制作用,直到细胞经历有丝分裂。作为G2/M期,只有在未检测到DNA损伤的情况下,PKMYT1磷酸化才会被CDC25C去除,最终细胞周期继续正常。也就是说,PKMYT1可以阻止DNA损伤细胞的细胞周期进程,并且可以通过控制细胞周期的转变来消除DNA损伤。此外,PKMYT1作为一种DDR相关激酶,对正常细胞和肿瘤细胞也发挥不同的作用,并且在几种肿瘤中检测到PKMYT1高表达,包括食管癌(ESCA),非小细胞肺癌(NSCLC),乳腺(BRCA),胃癌(GC),卵巢浆液性囊腺癌,肾透明细胞癌,肝细胞癌,神经母细胞瘤。
WEE 家族ADP-Glo实验原理见图3, WEE家族磷酸化底物需要消耗ATP转化成ADP,使用ADP-Glo试剂盒检测ADP的生成量来反应WEE的酶活,加入ADP-Glo试剂盒中的ADP-Glo Reagent可以将实验中未反应的ATP全部清除,加入ADP-Glo试剂盒中的ADP-Glo Detection会将实验中产生的ADP转化为ATP,并且里面含有荧光素酶的底物,最后使用酶标仪的化学发光模块检测信号值。