自从Fluo-3、Fluo-4问世以来,钙离子的检测便活跃在大量的
实验研究之中,随着实验的需求增加,钙离子检测探针也一次又一次的研
发出荧光强度更好、背景更低的一系列物美价廉的产品。市场常见的钙离子
检测试剂:Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-4、Fluo-8、cal-520、Calb
ryte-520等。由于目前市场上钙离子检测试剂的五花八门,有些同学就有些
慌了,到底哪个试剂才是*适合我实验的选择呢?请跟着百萤一起看看吧!
- 根据荧光颜色、荧光强度、背景这些会影响实验过程中的观察、
- 操作的因素来选择更适合自己实验的探针。
- 根据自己实验室现有仪器来选择适合自己实验的探针。
绿色荧光 | 深红色荧光 | 红色荧光 |
Fluo-3 | Cal-630 | Rhod-2 |
Fluo-4 | Calbryte 630(不需要丙磺舒) | Rhod-4 |
Fluo-8 | Cal-590 | |
Cal-520 | Calbryte 590(不需要丙磺舒) | |
Calbryte 520(不需要丙磺舒) |
适用于流式 | 适用于成像 |
Indo-1 | Fura-2 |
Fura-8(Fura-2升级版,S/N更高) | |
Cal Red R525/650 AM(相比Fura-2与Indo-1,它非紫外激发,细胞损伤小) |
1.丙磺舒(probenecid)被报道会影响钙离子通道,比如干扰环核苷酸门控通道,有没有可 以不用该试剂的钙离子探针? 回答: 丙磺舒(probenecid),是一种阳离子转运体抑制剂,用来降低探针进入胞内后被排除的几率,以提 高胞内信号。常见的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要丙磺舒,否则信号会很低。您可以选择Calbr yte系列,该系列无需丙磺舒(probenecid)仍会有很好的信号,降低干扰,是不含丙磺舒(proben ecid)产品的*佳选择。 图示:在存在丙磺舒(左)和不存在(右)的情况下进行Ca2+检测测定,并使用Ex / Em = 540/590 的FlexStation3测量了截止波长为570 nm的响应。 |
2.没有动态读数功能或者没有自加样功能的酶标仪还能做钙流检测吗? 回答: 可以。钙流检测的仪器常见的有FlexStation, FLIPR等,可以连续读数并带有自加样系统,这样就可 以在秒的时间范围内捕捉到更完 整的钙离子浓度变化。但如果实验室实在用不到这样的机器,可以考虑Cell Meter 钙检测免洗和免 丙磺舒检测试剂盒 (Cat# 36312) ,使用普通的底读酶标仪就可以了。该试剂盒使用了Fluo-8E AM探针,一旦与钙离子结合,信号增> 100倍,能够使信号维持1-2min左 右,给我们自己手动加样争取时间。 |
3.流式检测钙离子因为要取下管子加刺激剂,容易错过*高峰,有没有办法? 回答: 我们有流式检测钙离子试剂盒,Cat#36310,Cell Meter 钙测定流式细胞分析试剂盒,也可以选择 Fluo-8H AM探针,因Kd比较小, 可以使信号保留的时间久一些。 |
4.有检测植物细胞的钙离子探针吗? 回答: 有的。常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都适用于植物细胞,Fluo-4*常 用,若要获得更好的信噪比,推荐 其升级版本 Calbryte 520 AM。 |
5.内质网(ER)或者线粒体内的钙离子浓度变化,分别使用什么探针? 回答: ER钙离子检测可使用Kd 较高的Rhod-5N, AM (Cat# 21070). 线粒体钙离子检测可使用 Rhod-2 AM (Cat# 21064)。Rhod-2 在低 浓度时特异识别线粒体。 |
6.血液等体液的里的钙离子浓度用什么检测方法? 回答: 人体血液里钙离子的浓度大约在19 -10.5 mg/dL范围内。血液里钙离子浓度过低或者过高可引起低 钙血症和高钙血症 。 Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒(Cat#36360)可用于定量体液的钙离子浓度,可使用96孔或者384孔板经 酶标仪独取数值。不需样本分离 直接检测,30min可完成,*低检测0.03mM的钙离子。 |
7.荧光探针的AM、Dextran葡聚糖形式有什么区别? 回答: AM 形式通过孵育即可进入细胞内,简便。若检测孵育时间久容易发生区室化,比如钻进了内质网 等亚器官内。 Dextran*大的优势 就是降低了区室化作用,但是需要介入方式进入细胞内,比如microinject等。 |
8.我们需要高通量检测,选择什么产品? |
品牌 | 产品名称 | 货号 |
AAT | Cell Meter 钙检测免洗和免丙磺舒检测试剂盒 | Cat#36312 |
AAT | Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒 | Cat#36315 |
AAT | Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒 | Cat#36320 |
AAT | Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 | Cat#36325 |
AAT | Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 | Cat#36201 |
AAT | Cell Meter 钙检测免洗和免丙磺舒检测试剂盒 | Cat#36312 |
AAT | Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 | Cat#36318 |
钙离子荧光探针选择建议:
单波长荧光探针 (根据荧光强度越强,背景越低依次排列)
图示: CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜,在96孔黑色壁/透
明底板中。将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中,并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLH
HBS替换染料加载培养基,加入50μL50μMATP,并使用FITC通道用荧光显微镜(Keyence)成像。
双波长比率荧光探针
常见问题解答
回答:下列产品免洗,无需去除培养基,加入染料孵育,直接加刺激剂即可检测。适用于高通量。