GelNest™基质胶是由小鼠肿瘤组织中提取的基底膜成分制备而成,包含的主要成分有层粘连蛋白、IV型胶原蛋白硫酸肝素糖蛋白等。这些成分可以提供细胞黏附、分化和增殖所需的支持和信号,同时也可以模拟生理环境中基底膜的特性,提高细胞培养的成功率和效果。
1.GelNest™高浓度基质胶用于哪些实验?
2.GelNest™基质胶包装瓶的材质是什么?
COP瓶优势:
★可耐受-196℃低温储存;
★较玻璃材质而言不易破碎;
★低蛋白吸附性;
★可耐受PH值>10的溶液,不易产生脱片,对基质胶进行安全性保护。
3.如何将GelNest™基质胶用于3D培养?怎样制作3D胶?需要将细胞嵌入到GelNest™基质胶中吗?
4.使用GelNest™基质胶时,移液器吸头和离心管需要预冷吗?
5.GelNest™基质胶会快速聚合吗?
6.什么情况下,需要使用无酚红GelNest™基质胶?
此外,酚红和非甾体雌激素结构类似,有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。
7.如何从GelNest™基质胶中收获细胞?
对于代谢研究和RNA抽提,建议在4℃使用细胞回收解决方案进行非酶反应的细胞收集。因为GelNest™基质胶中含有痕量的RNA,进行RNA分析时,应设一个GelNest™基质胶(不接种细胞)的对照组。
其它从GelNest™基质胶中收获细胞的方法:降低温度至4℃-6℃使GelNest™基质胶解聚,需要一定的时间并且仅适合一部分应用。
8.GelNest™基质胶包被过的培养皿可以储存多长时间呢?
需要保存的情况下,可在37°C培养箱中最多存放7天。保存时GelNest™基质胶表面需要使用无血清培养基均匀覆盖,保持湿润。
9.哪些情况下应该选用薄胶?什么时候用厚胶呢?3D培养有哪些应用?
厚胶主要用于3D细胞培养,如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构(RingAssay),以及进行细胞侵袭实验等。3D细胞培养实验,主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构,如生物组织等。
10.进行内皮管形成实验,应该选用多大浓度的GelNest™基质胶呢?
11.GelNest™基质胶的最低成胶浓度是多少?
GelNest™基质胶最低成胶浓度为7mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释,不同批次间的GelNest™基质胶浓度有差异,应该根据最终工作浓度(mg/mL)算出需要加入的稀释液体(如PBS或无血清培养基)的量。
用于体内研究的GelNest™基质胶,为了避免成胶不完全,最终工作浓度不应低于10mg/mL。
12.GelNest™基质胶胶块在体内可以维持多长时间?
13.怎样稀释GelNest™基质胶?
14.应该如何对GelNest™基质胶移液操作?
如果使用移液管(Pipets),需要分液5mL时,应该吸取6mL,分液到移液管内仍有1mL时即停止;如果使用自动移液器(Pipetman),按压到第二档位吸液,然后按压到第一档位进行分液。
15.为什么我的GelNest™基质胶很粘稠?
GelNest™基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。粘稠的高浓度GelNest™基质胶不稀释也可以直接使用,如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子,注射于小鼠体内后,细胞可以保持原位,便于原位分析和/或以后的切除;或者稀释后,按照标准浓度的GelNest™基质胶产品使用方法使用,具体稀释浓度根据实验需求确定。
除因为产品本身浓度高而粘稠外,基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏GelNest™基质胶的冰箱带有自动除霜功能,冰箱除霜过程中升温,可能使基质胶成胶。所以,切忌将GelNest™基质胶储藏于此类冰箱中。
为保证GelNest™基质胶的使用效果,冻融次数应该尽可能减少。拿到新的GelNest™基质胶后,请按照单次用量进行分装。每次融化操作,GelNest™基质胶都应该放置于冰上。
16.为什么GelNest™基质胶在37°C成胶,而在4°C时却呈液体状态?
这些蛋白构成了GelNest™基质胶的基本结构。在22℃-37℃温度条件下,大分子间的共价键可以结合,促使GelNest™基质胶形成凝胶。而在低温条件(如4℃)下,由于没有足够的能量促使共价键结合,所以GelNest™基质胶呈现液体状态。
17.GelNest™基质胶可以反复冻融吗?
18.为什么细胞没有贴壁?GelNest™基质胶也脱落了?
19.未稀释的GelNest™基质胶中出现的沉淀应该怎么样处理?
20.未使用完的GelNest™基质胶应该怎样保存的?
21.GelNest™基质胶可以储存在-70℃吗?
22.GelNest™基质胶会有自发荧光吗?
23.使用GelNest™基质胶培养的细胞,如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验,该怎样固定呢?如何避免解聚?
如果用户需要进行免疫荧光检验,加入戊二醛后,会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题,我们建议用户在固定之后,使用NaBH4进行淬灭。NaBH4极易产生气泡,进行该步骤时,必须在水平操作台上小心操作,避免晃动,尽量减少气泡的形成。另外,用户也可以尝试使用较低浓度的戊二醛进行固定,如0.1%到0.5%,浓度越低,背景荧光信号越少。
24.为什么GelNest™的颜色不一样?
酚红在冷冻或者酸性环境下呈现明黄色,在接近生理pH值或0ºC以上呈现红色。
GelNest™出现颜色上的区别是正常情况,不会影响产品质量,并且在和5%的二氧化碳平衡后,会恢复到统一颜色。