其实所谓的缓冻是一般使用传统冻存液冻存过程中需要程序降温。
传统的冻存液,一般由胎牛血清、DMSO及基础培养基等组分组成。冻存保护的DMSO组分,在进入细胞后结合细胞内部的水份,降低冰点,防止细胞在冷冻过程中形成冰晶对细胞造成损害。
但是DMSO只能在细胞内部保护细胞,细胞外部没有保护,水结冰晶会在细胞膜外部受到损伤,为了防止冰晶过大,使用时必须采用程序降温的方式,才可保证细胞复苏的成功率(80%以上)。
若不采用程序降温的形式,有些冻存的细胞,甚至复苏成功率为0。
友康无血清细胞冻存液作用原理:
我公司无血清细胞冻存液,为多种保护剂组合,在细胞内外进行双重保护,大大提高了细胞复苏存活率。无血清细胞冻存液,含多种保护剂成分。
一些保护剂,易于穿透细胞,避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞,同时另一些保护剂不能穿透细胞,但可以在冰晶形成之前,优先结合细胞外的水分子,降低细胞外溶液的电解质浓度,减少阳离子进入细胞的数量,我公司无血清细胞冻存液,为多种保护剂组合,在细胞内外进行双重保护,大大提高了细胞复苏存活率。
1.传统细胞冻存液与无血清细胞冻存液使用方法对比
使用步骤 | 传统冻存液 | 无血清冻存液 |
产品保存条件 | 分装成小管,-20度(避免反复冻融) | 2-8度保存,无需分装 |
冻存过程 | 程序降温(4度30min, -20度1h ,-80度过夜,次日投入液氮内) | 直投-80度冰箱过夜,次日入液氮 |
复苏过程 | 快复苏,加新鲜培养液,离心取出保护液 | 快复苏,加新鲜培养液,离心取出保护液 |
2.冻存后细胞复苏数据对比
细胞系名称 |
传统冻存液 |
YOCON冻存液 |
A549(肺癌) |
85% |
95% |
MDCK(犬肾细胞) |
90% |
95% |
3T3(小鼠胚胎成纤维细胞) |
90% |
93% |
hepG2(肝癌细胞) |
86% |
93% |
MK2 (恒河猴肾细胞) |
88% |
95% |
杂交瘤细胞 |
80% |
90% |
MSC(间充质干细胞) |
80% |
95% |
单个核细胞(原代分离) |
50% |
90% |