BiomicV3微生物鉴定仪是由美国 Giles scientific公司生产的,利用数字成像技术进行微生物检验的专用设备。该设备可读取市面上最常见的三种鉴定卡:API (bioMerieux), Crystal (BD) and RapID (Remel),进行微生物鉴定。
为了保证检验结果的准确性,需要在安装调试阶段对鉴定结果进行有效质控,下面以梅里埃鉴定卡 API 20E为例,说明 Biomic V3的质控流程。
我们知道,培养基、鉴定卡、试剂、操作与环境等条件都对鉴定结果的准确性产生影响。在确定以上因素都适合的情况下,即可利用标准菌株,进行质控试验对软件进行调试,使得鉴定结果准确无误。
此次我们采用的标准菌株包括大肠杆菌,沙门氏菌和阪崎肠杆菌,这三种菌株是食品质量安全控制中,非常典型的三种致病菌;鉴定卡 API 20E是在食品肠道致病菌检测中广泛应用的鉴定卡。该鉴定卡是由 20个含干燥底物的小管所组成。这些测定管用细菌悬浮液接种。培养一定时间后,通过代谢作用产生颜色的变化,或是加入试剂後变色而观察其结果。
试验流程如下:
(1)标准菌株培养后,挑取单菌落,加入 NaCl 0.85% 悬浮液中混匀成为菌悬液备用。
(2)用吸管将细菌悬液充满檬酸CIT、VP各GEL管;其它管仅充满管部(不是杯部)。
(3) ADH、LDC、URE、ODC和H2S,则用矿物油覆盖。
(4)盖上盖子,孵育於35~37°C 18~24小时。
(5)在VP, TDA, IND中加入附加试剂。
(6)放入BIOMIC的抽屉里,进行结果判读。
试验注意事项包括:
(1)挑取纯培养的单菌落。如有对于浓度有要求的鉴定卡,要用比浊仪检测达到需要的浊度。
(2)在装鉴定卡的塑料壳子内,加入适量水分保持湿度,避免培养时烘干。
(3)最好使用梅里埃的相关试剂,不要使用过期试剂。
(4)加样时注意,充满管部还是杯部。
(5)在使用前,所有附加试剂需达到室温(20-30°C)。
(6)使用後,所有的安瓿,试验条和培养盒在处置之前都必须高压灭菌,烧成灰或浸泡於杀菌剂中。
根据结果的图像和数据,进行软件调节,按照上述方法再进行一次质控试验,进行结果
判读,最后得到的结果如下:
沙门菌属 Salmonella sp. 结果概率99.8 % 典型
(ONPG -) (ADH +) (LDC +/-) (ODC +) (CIT +) (H2S +) (URE -) (TDA -) (IND -) (VP -)
(GEL -) (GLU +) (MAN +) (INO +) (SOR +) (RHA +) (SAC -) (MEL -) (AMY -) (ARA +)
阪崎肠杆菌 Ent. Sakazakii 结果概率97.3 % 很典型
(ONPG +) (ADH +) (LDC -) (ODC +) (CIT +) (H2S -) (URE -) (TDA -) (IND -) (VP -)
(GEL -) (GLU +) (MAN +) (INO +) (SOR -) (RHA +) (SAC +) (MEL +) (AMY +) (ARA +)
大肠埃希菌 E. coli 结果概率99.6 % 很典型
(ONPG +) (ADH -) (LDC +) (ODC +) (CIT -) (H2S -) (URE -) (TDA -) (IND +) (VP -)
(GEL -) (GLU +) (MAN +) (INO -) (SOR +) (RHA +) (SAC +) (MEL +) (AMY -) (ARA +)
至此,质控完毕,可进行样品检测。