E. coli RNase H（E. coli 核糖核酸酶 H）是一种能够特异性降解RNA-DNA杂交链中RNA部分的酶，在DNA复制、修复和转录等过程中发挥重要作用。它通过切割RNA链，确保DNA模板的完整性和稳定性，因此在分子生物学实验中被广泛应用，例如cDNA合成、rRNA去除和RNA干扰研究。然而，RNase H 在使用过程中也存在一些缺陷：1）它可能对单链RNA或DNA产生非特异性切割，影响实验结果的准确性；2）其热稳定性较差，难以在高温条件下保持活性，因此不适用于高温逆转录、PCR等需要高温环境的实验。这些局限性促使研究人员开发热稳定RNase H，以拓展其应用范围并提高实验效率。
图1.RNase H作用机理
源自Thermus thermophilus的Thermostable RNase H（热稳定核糖核酸酶H）是E. coli RNase H的同源物，在功能上表现出相似的核糖核酸内切酶特性。它能够精准识别并高效切割 RNA:DNA杂交体中的RNA链磷酸二酯键，同时确保DNA链的完整性。通过对蛋白结构的深入分析发现，尽管T. thermophilus RNase H的整体稳定性分布与E. coli RNase H具有一定相似性，但前者在整体稳定性以及残基局部稳定性方面均表现出显著提升。Thermostable RNase H的最佳活性温度在65℃以上，更高的反应温度能够显著提升反应的特异性和效率，减少非特异性切割。这一特性使其在分子生物学实验中展现出广泛的应用潜力，例如：
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rRNA去除；
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mRNA加帽率检测；
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去除杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A)；
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cDNA第二链合成中去除mRNA；
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提升高温逆转录、等温扩增、PCR实验的扩增效率。
图2.Thermostable RNase H和E. coli RNase H三维结构图[1]
Thermostable RNase H常用于病原菌检测实验中，如在宏基因组测序（mNGS）和病原靶向测序（tNGS）中常用于rRNA去除实验，若分子酶中存在宿主或其他背景菌核酸残留，可能会严重影响检测结果的准确性。为此，翌圣生物基于UCF.ME®超洁净工艺技术推出UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)，该产品由UCF.ME®超洁净分子酶生产基地生产，从物料筛选到环境控制，从工艺优化到质量检测，每一环节均经过严格把控，确保极低的背景菌gDNA残留和核酸酶残留，为实验结果的准确性、可靠性和重复性提供了强有力的保障。
产品优势
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活性强、批间一致性好；
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极低宿主 gDNA 残留：＜0.02 Copies/U；
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无核酸外切酶、切口酶、RNase 酶残留；
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优异的稳定性：在4℃处理32天、25℃处理16天和37℃处理7天后，酶活性无明显下降。
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产品名称 |
货号 |
规格 |
目录价 |
活动价 |
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UCF.ME® Thermostable RNase H |
14545ES72 |
250 U |
759元 |
0元 |
活动细则：
1、活动时间：2025年3月5日-2025年3月31日；
2、活动名额有限，每位客户限一套。
性能展示
翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)
01
活性强、批间一致性好
使用3批次UCF.ME® Thermostable RNase H分别与RNA:DNA 底物进行孵育，并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明，翌圣0.05 U的UCF.ME® Thermostable RNase H能有效切割20 pmol RNA:DNA底物中的RNA，且批间一致性优异，展现了产品的高稳定性和可靠性。
图3.UCF.ME® Thermostable RNase H活性检测结果
注：反应条件：50℃ 20min；RNA:DNA底物-20 pmol
02
宿主gDNA残留低：＜0.02 Copies/U
通过对不同批次的UCF.ME® Thermostable RNase H进行宿主（E.coli）gDNA残留检测，结果显示，3批次产品的宿主gDNA残留量均远低于0.02 copies/U，确保了产品的高纯度和实验的可靠性。
图4.UCF.ME® Thermostable RNase H宿主gDNA残留结果
03
无核酸外切酶、切口酶、RNase酶残留
将25 U UCF.ME® Thermostable RNase H分别与核酸底物孵育，并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明，翌圣的3个批次UCF.ME® Thermostable RNase H均未检测到核酸外切酶、切口酶或RNase残留，为实验结果的准确性和可靠性提供了有力保障。
图5.UCF.ME® Thermostable RNase H核酸外切酶、切口酶、RNase残留检测结果
04
稳定性好
将UCF.ME® Thermostable RNase H分别置于4℃处理32天、25℃处理16天和37℃处理7天后，测定其酶活。结果显示，酶活均无明显下降，充分证明了翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H在宽温度范围内具有优异的稳定性，能够满足不同实验条件的长期存储和使用需求。
图6.UCF.ME® Thermostable RNase H加速稳定性结果
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来源 |
产品名称 |
货号 |
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T. thermophilus |
UCF.ME® Thermostable RNase H |
14545ES |
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E. coli |
RNase H |
12906ES |
参考文献：
[1] Hollien J, Marqusee S. Structural distribution of stability in a thermophilic enzyme[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.
[2] Wolf E J , Dai N , Chan S H .Selective Characterization of mRNA 5′End-Capping by DNA Probe-Directed Enrichment with Site-Specific Endoribonucleases[J].[2025-03-03].
[3] Gu H , Sun Y H , Li X Z .Novel rRNA-depletion methods for total RNA sequencing and ribosome profiling developed for avian species[J].Poultry Science, 2021, 100(7):101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.