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限量试用 | 超洁净UCF.ME® Thermostable RNase H,精准切割,实验更高效!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2025-03-14T00:00 (访问量:3582)

E. coli RNase H(E. coli 核糖核酸酶 H)是一种能够特异性降解RNA-DNA杂交链中RNA部分的酶,在DNA复制、修复和转录等过程中发挥重要作用。它通过切割RNA链,确保DNA模板的完整性和稳定性,因此在分子生物学实验中被广泛应用,例如cDNA合成、rRNA去除和RNA干扰研究。然而,RNase H 在使用过程中也存在一些缺陷:1)它可能对单链RNA或DNA产生非特异性切割,影响实验结果的准确性;2)其热稳定性较差,难以在高温条件下保持活性,因此不适用于高温逆转录、PCR等需要高温环境的实验。这些局限性促使研究人员开发热稳定RNase H,以拓展其应用范围并提高实验效率。

图1.RNase H作用机理

 

源自Thermus thermophilus的Thermostable RNase H(热稳定核糖核酸酶H)是E. coli RNase H的同源物,在功能上表现出相似的核糖核酸内切酶特性。它能够精准识别并高效切割 RNA:DNA杂交体中的RNA链磷酸二酯键,同时确保DNA链的完整性。通过对蛋白结构的深入分析发现,尽管T. thermophilus RNase H的整体稳定性分布与E. coli RNase H具有一定相似性,但前者在整体稳定性以及残基局部稳定性方面均表现出显著提升。Thermostable RNase H的最佳活性温度在65℃以上,更高的反应温度能够显著提升反应的特异性和效率,减少非特异性切割这一特性使其在分子生物学实验中展现出广泛的应用潜力,例如:

§ 

rRNA去除;

§ 

mRNA加帽率检测;

§ 

去除杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A);

§ 

cDNA第二链合成中去除mRNA;

§ 

提升高温逆转录、等温扩增、PCR实验的扩增效率。

 

图2.Thermostable RNase H和E. coli RNase H三维结构图[1]

 

Thermostable RNase H常用于病原菌检测实验中,如在宏基因组测序(mNGS)和病原靶向测序(tNGS)中常用于rRNA去除实验,若分子酶中存在宿主或其他背景菌核酸残留,可能会严重影响检测结果的准确性。为此,翌圣生物基于UCF.ME®超洁净工艺技术推出UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545),该产品由UCF.ME®超洁净分子酶生产基地生产,从物料筛选到环境控制,从工艺优化到质量检测,每一环节均经过严格把控,确保极低的背景菌gDNA残留和核酸酶残留,为实验结果的准确性、可靠性和重复性提供了强有力的保障。

 

 

产品优势

 

· 

活性强、批间一致性好;

· 

极低宿主 gDNA 残留:<0.02 Copies/U;

· 

无核酸外切酶、切口酶、RNase 酶残留;

· 

优异的稳定性:在4℃处理32天、25℃处理16天和37℃处理7天后,酶活性无明显下降。

 

  

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产品名称

货号

规格

目录价

活动价

UCF.ME® Thermostable RNase H

14545ES72

250 U

759元

0元

 

活动细则:

1、活动时间:2025年3月5日-2025年3月31日

2、活动名额有限,每位客户限一套。

 

 

 

性能展示

 

翌圣UCF.ME®  Thermostable RNase H  (Cat#14545)

01

活性强、批间一致性好

使用3批次UCF.ME® Thermostable RNase H分别与RNA:DNA 底物进行孵育,并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明,翌圣0.05 U的UCF.ME® Thermostable RNase H能有效切割20 pmol RNA:DNA底物中的RNA,且批间一致性优异,展现了产品的高稳定性和可靠性。

图3.UCF.ME® Thermostable RNase H活性检测结果

注:反应条件:50℃ 20min;RNA:DNA底物-20 pmol

 

02

宿主gDNA残留低:<0.02 Copies/U

通过对不同批次的UCF.ME® Thermostable RNase H进行宿主(E.coli)gDNA残留检测,结果显示,3批次产品的宿主gDNA残留量均远低于0.02 copies/U,确保了产品的高纯度和实验的可靠性。

图4.UCF.ME® Thermostable RNase H宿主gDNA残留结果

 

03

无核酸外切酶、切口酶、RNase酶残留

将25 U UCF.ME® Thermostable RNase H分别与核酸底物孵育,并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明,翌圣的3个批次UCF.ME® Thermostable RNase H均未检测到核酸外切酶、切口酶或RNase残留,为实验结果的准确性和可靠性提供了有力保障。

图5.UCF.ME® Thermostable RNase H核酸外切酶、切口酶、RNase残留检测结果

 

04

稳定性好

将UCF.ME® Thermostable RNase H分别置于4℃处理32天、25℃处理16天和37℃处理7天后,测定其酶活。结果显示,酶活均无明显下降,充分证明了翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H在宽温度范围内具有优异的稳定性,能够满足不同实验条件的长期存储和使用需求。

图6.UCF.ME® Thermostable RNase H加速稳定性结果

 

如需试用,请扫描文中二维码联系我们的技术人员,领取免费试用名额!

 

 

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来源

产品名称

货号

T. thermophilus

UCF.ME® Thermostable RNase H

14545ES

E. coli

RNase H

12906ES

 

参考文献:

[1] Hollien J, Marqusee S. Structural distribution of stability in a thermophilic enzyme[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.

[2] Wolf E J , Dai N , Chan S H .Selective Characterization of mRNA 5′End-Capping by DNA Probe-Directed Enrichment with Site-Specific Endoribonucleases[J].[2025-03-03].

[3] Gu H , Sun Y H , Li X Z .Novel rRNA-depletion methods for total RNA sequencing and ribosome profiling developed for avian species[J].Poultry Science, 2021, 100(7):101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.

 

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