Biodropsis超微量核酸蛋白分析仪-应用指南-分析方法-资讯-生物在线

Biodropsis超微量核酸蛋白分析仪-应用指南

作者:北京五洲东方科技发展有限公司 2011-08-12T00:00 (访问量:9219)

  Biodropsis BD-1000/BD-2000型是专为测量核酸和蛋白浓度而设计的超微量分光光度计。独有的样品保留系统通过表面张力来把样本保留在两根检测光纤中间,使得仪器在无需比色皿的前提下,直接检测较高浓度的样本。BD-1000在2秒钟以内即可完成样品测量,BD-2000在8秒内可完成样品测量获得高精度和高重复性的结果。

 

  Biodropsis超微量核酸蛋白分析仪主要用于检测核酸包括dsDNA、ssDNA、RNA和纯化后蛋白包括BSA、igG、lysozyme等纯度较高的蛋白。这款仪器体积小,上样只需要0.5-2ul,检测时间短,测量浓度范围大,操作简单,不需要比色皿,减少了耗材的费用,减少了比色皿带来的实验误差。

 


  Biodropsis超微量核酸蛋白分析仪的设计原理是基于Beer-Lambert定量设计的。根据核酸在260nm处、蛋白在280nm处有特定的吸收峰来测量核酸、蛋白的浓度。当测量一个取样时,穿透取样溶液的光强度被记录下来。取样溶液的强度和空白强度被用来计算取样吸光率的公式如下:

     
  Beer-Lambert方程:A = E * b * c
  A是吸光率,单位为A;E是基于波长的摩尔吸光度系数(或者说是吸光度系数)单位为L/mol-cm;b是通道长,单位为cm;c分析物浓度,单位为mol/L或摩尔浓度(M)。在已知A、b、E的情况下,我们可以得出c值。


  Biodropsis超微量核酸蛋白分析仪的使用误区:
  1)测量核酸时发现结果不准:首先要确定核酸样品的纯度,如果是DNA样品,260/280比值应该在1.6-2.0之间。比值小于1.6说明有蛋白类物质的干扰,大于2.0说明有 RNA的干扰。如果是RNA样品,260/280应该大于2.0,如果值偏高如2.5以上,可能是RNA降解的原因,如果小于2.0说明有蛋白类物质的干扰。我们还可以通过230nm、和320nm处的吸收峰来判断样品的纯度,230表示存在以下污染物如:碳水化合物、多肽、苯酚等,核酸和蛋白在320nm处的吸收峰几乎为零,所以如果有吸收说明有杂质,可能是稠环芳香有机试剂的污染。
  2)适合测量纯度高的蛋白样品,不能测量含有杂质的蛋白样品:通过上面的公式我们能够发现,c值是与吸光度A成正比的,如果样品中含有杂质成分,且杂质在280处有吸收峰的话就会造成测量值不准,一般我们提蛋白过程中使用的有机试剂如果残留的话就会造成测量蛋白值不准的情况。
  3)测量两个样品中间务必要用吸水的面巾纸和蒸馏水清洁测量臂:如果不做清洁,残留的样品会对后来样品的测量造成影响。切记不要用擦镜纸擦拭,因为擦镜纸不吸水。
  4)测量同一个样品的时间不宜过长:因为上样量很少,随着时间的推迟样品会有所蒸发,造成测量出来的浓度有误差。
  5)如果测量值不是很准,建议可以把样品稀释到适当浓度再进行测量。
  6)如果感觉机器的平衡性不好,可以通过以下方法检测:以空气为blank,反复测量空气,两次测量之间间隔5秒,测出的吸光度值应该小于0.04,说明平衡性良好。

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