脂蛋白相关磷脂酶A2 (lipoprotein-associated phospholipase 2, Lp-PLA2),亦称血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH),由PLA2G7基因编码的441个氨基酸组成,分子量约为45 kDa。Lp-PLA2经成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌,并受炎性介质的调节,具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。
近年来越来越多的证据表明其具有促进动脉粥样硬化(AS)的作用,是AS中的一种新的炎性反应标志物。Lp-PLA2在血液中的浓度可动态地反映动脉粥样斑块的炎症程度,浓度越高风险越大。此外,检测血中Lp-PLA2水平可以用来识别冠心病的高危个体,根据Mayo Medical Laboratories的研究,当血液中Lp-PLA2浓度高于235 ng/mL,提示心肌梗死、冠心病和缺血性脑卒中等心血管疾病的发生的风险。
Lp-PLA2为反映动脉粥样硬化斑块破裂及血栓形成事件的独立风险因子,与其具有高度一致性及精确性,是急性动脉粥样硬化血栓复发事件高风险患者的准确风险评估标志物。
人Lp-PLA2单克隆抗体
科赛格最新推出一批高质量的抗人Lp-PLA2单克隆抗体,其中4株抗体能够用于高灵敏度的双抗夹心法免疫检测。利用我公司化学发光检测平台对自产抗体对进行表征,显示其检测范围广,灵敏度高。检测范围约为0.13-1000 ng/mL,最低检出限可达0.13ng/mL。所有推荐的抗体对均经过大量正常血清样本、动脉粥样硬化和脑梗塞等病理样本反复评测。
性质 |
参数 |
靶标种属 |
人类 |
宿主 |
Balb/c小鼠 |
融合细胞 |
Sp2/0 |
免疫原 |
人脂蛋白相关磷脂酶A2 |
纯化方式 |
Protein G 亲和纯化 |
保存缓冲液 |
磷酸盐缓冲液(pH 7.6) |
应用范围 |
Lp-PLA2免疫检测, 免疫组化,Western blotting等 |
货号 |
CSB-DA113BmN①, CSB-DA113BmN③, CSB-DA113BmN④, CSB-DA113BmN⑤. |
标准曲线--Calibration Curve
所有的单克隆抗体分别用作捕获抗体和标记抗体,然后组合成不同抗体对,用于双抗夹心法免疫检测。不同抗体对分别对各种浓度的Lp-PLA2进行定量检测,最后选择出最好的配对方式如下(捕获抗体-标记抗体):
A组合:CSB-DA113BmN①- CSB-DA113BmN③;
C组合:CSB-DA113BmN③- CSB-DA113BmN①;
E组合:CSB-DA113BmN④- CSB-DA113BmN⑤
图1. 不同Lp-PLA2抗体组合的标准曲线
精密度--Precision
利用我公司的化学发光平台对同一批次的抗体及不同批次的抗体进行精密度分析,所有抗体批内差均≤5%,批间差均≤10%。通过检测质控品Control Low、Control High,计算出批内、批间的变异系数(CV)见下表:
|
|
批内试验 (n=10) |
批间试验(n=30) |
||||
|
|
平均浓度 (ng/mL) |
标准差 |
变异系数 (%) |
平均浓度 (ng/mL) |
标准差 |
变异系数(%) |
A组合 |
Control Low |
152.94 |
4.49 |
2.9 |
152.38 |
10.51 |
6.9 |
Control High |
344.52 |
10.67 |
3.1 |
345.93 |
30.10 |
8.7 |
|
C组合 |
Control Low |
157.21 |
5.76 |
3.7 |
157.67 |
14.51 |
9.2 |
Control High |
349.97 |
11.93 |
3.4 |
351.09 |
31.60 |
9.0 |
|
E组合 |
Control Low |
150.49 |
6.19 |
4.1 |
149.81 |
8.53 |
5.7 |
Control High |
338.01 |
23.81 |
7.0 |
337.35 |
26.02 |
7.7 |
回收率--Recovery
通过在化学发光平台分析不同组合的抗体对,三种组合的回收率分别为99.9%、100.7%和101.7%,由此可见抗体准确度可靠。
临床比对Clinical Comparison
为验证抗体对适用于临床检测, 在化学发光平台利用各种抗体对组合(A、C和E组合)对81例血清进行检测,所有样本均是经过国内和国外注册的IVD诊断试剂盒检测赋值。检测结果如图3,本公司自产抗体用于检测临床样本和IVD诊断试剂盒检测结果相关性较好,能够满足临床检测需求。
图2. 不同Lp-PLA2抗体组合对临床血样的检测
稳定性分析--Stability
将四种Lp-PLA2单克隆抗体(未 加任何保护剂)置于-20℃、2-8℃和37℃,每隔3天测抗体效价,从下图可以看出CSB-DA113BmN①和CSB-DA113BmN③在2-8℃ 和37℃条件下抗体的效价相对于-20℃条件变化很小,说明两只抗体很稳定;CSB-DA113BmN④和CSB-DA113BmN⑤在2-8℃条件下比 较稳定,37℃条件下抗体的效价有略微下降。
科赛格亦提供高质量的Lp-PLA2蛋白,货号为CSB-DP113B。该蛋白以液体形式供应,可用于免疫测试的校准品、免疫印迹(WB)等方面。
参考文献--References
1. Carlquist JF, Muhlestein JB, Anderson JL. Lipoprotein-associated phospholipase A2: a new biomarker for cardiovascular risk assessment and potential therapeutic target. Expert Rev Mol Diagn. 2007 Sep;7(5):511-7
2. Davidson MH, Corson MA, et al. Consensus panel recommendation for incorporating lipoprotein-associated phospholipase A2 testing into cardiovascular disease risk assessment guidelines. Am J Cardiol. 2008 Jun 16;101 (12A):51F-57F.
3. F D Kolodgie, et al. Pathologic assessment of the vulnerable human coronary plaque. Heart. 2004 Dec; 90(12): 1385–1391.
4. Goldstein LB, Bushnell CD, Adams RJ, et al; on behalf of the American Heart Association Stroke Council, Council on Cardiovascular Nursing, Council on Epidemiology and Prevention, Council for High Blood Pressure Research, Council on Peripheral Vascular Disease, and Interdisciplinary Council on Quality of Care and Outcomes Research. Guidelines for the primary prevention of stroke: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 2011; 42:517-584.
5. Greenland P, Alpert JS, Beller GA, et al. 2010 ACCF/AHA guideline for assessment of cardiovascular risk in asymptomatic adults: a report of the American College of Cardiology Foundation/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2010;56 (25):e50-e103.
6. Jellinger PS, Smith DA, Mehta AE, et al; the AACE Task Force for Management of Dyslipidemia and Prevention of Atherosclerosis. American Association of Clinical Endocrinologists’ Guidelines for Management of Dyslipidemia and Prevention of Atherosclerosis. Endocr Pract. 2012;18 (Suppl 1):1-78.