图一:AquaMax4000微孔板洗板机和LifeSep磁力架可应用于MAGPIX多重磁珠检测系统
材料:
- MAGPIX校准试剂盒(Life Technology,Cat.#MPX-CAL-K25)
- 磷酸盐缓冲液(PBS)
- LifeSep 96F磁力架(Dexter Magnetic Technology, Cat.#2501008-1)
- 96孔全透明微孔板(Greiner)
- ®VelosTM 高内涵系统(Molecular Devices)
方法:
步骤一:按1:50比例稀释磁珠于PBS中,96孔板中每孔加入100ul磁珠混合液
步骤二:洗板前先将微孔板放入ImageXpress Velos上成像,获得磁珠数目
步骤三:对AquaMax微孔板洗板机设置:软件中创建一个新微孔板参数,选择Greiner 96孔板,高度输入24.2mm(正常微孔板的高度+10mm LifeSep磁力架高度),使用仪器自带的微孔板深度自动探测功能,可以精确地检测出微孔板的深度,保存检测数据于程序中
步骤四:使用PBS清洗在AquaMax4000洗板机上的微孔板,洗板机按下面参数进行设置建后,会得到最佳结果(能够有效减少清洗过程中磁珠的损失)
吸液
- 位置:边缘
- 洗头吸液速率:中速
- 洗头下降速度:3
- 高度:5mm
分装
- 体积:150ul
- 洗头分液速率:5
- 从第一步开始重复2遍
- 吸液(如上所设置)
使用ImageXpress Velos高内涵系统所带532nm波长的激光光源扫描绿色荧光信号,软件分析后,可以得到微孔板清洗前后每孔中磁珠数目。
清洗前96孔板中每孔磁珠数目
每孔中的磁珠平均数=615
清洗后96孔板中每孔磁珠数目
每孔中的磁珠平均数=585
保留率=95.1%
图二:微孔板中选取一个孔成像,对比清洗前后的结果
清洗前 清洗后
选取D5孔 选取D5孔
磁珠数目:633 磁珠数目:605
结论:
清洗过程中能够有效降低磁珠的损失率是保证MAGPIX试验成功的关键因素,当AquaMax微孔板洗板机清洗96孔板中的MAGPIX磁珠时,使用LifeSep磁力架,按照上面所述进行仪器设置后,超过95%的磁珠保留在微孔板中。AquaMax微孔板洗板机所具有高度自动调节和洗头可换的功能,确保了其能够灵活的适应各种试验的要求。