RNA提取的实验步骤为:破碎组织一分离RNA一沉淀RNA一洗涤RNA一融解RNA一保存RNA。其中样品细胞和组织的有效破碎更是在RNA提取的实验过程中起到关键作用,前期细胞破碎的不完全,会导致后续实验出现各种问题。本实验使用了上海净信的冷冻研磨仪来帮助人体宫颈样品研磨后提取RNA。
冷冻研磨仪+2ml适配器+2ml研磨管若干+3mm和5mm钢珠若干
实验过程:
1、将仪器开机预冷,温度设置为-20℃。
2、将提前剪碎的样品及研磨珠放入2ml研磨管中,再根据实验方法吸取核酸提取液Trizo。
3、等研磨仪主机温度降到-20℃后,把适配器固定到研磨仪主机中。
4、设置运行参数参考,65HZ,60S,研磨5次。
注意事项:
1.因宫颈组织中结缔组织较多,准备样品时可先将样品提前剪碎。
2.实验过程中需注意平面配平。
3.定期清理适配器及研磨珠,防止残留的药品或样品对其造 成腐蚀(清洗研磨珠时需要先用75%的酒精进行浸泡4小时,浸泡完成后再用高压灭菌锅进行灭菌处理,最后用超声波清洗机进行清洗。)
4.研磨完毕后需关闭电源,将安全锁归位。
细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说,是一个很关键的步骤。上海净信冷冻研磨仪能够有效防止RNA的损失和降解,保留蛋白活性。研磨时处于封闭状态,无交叉污染,具备安全罩及安全锁,无需涉及液氮,安全性高。