巨噬细胞广泛存在于体内各个器官，包括表皮、角膜以及无血管的关节内部等。在对巨噬细胞的体内生物学进行研究时，巨噬细胞耗竭是重要方法之一。氯膦酸盐脂质体是目前最为成熟、便捷且经济的巨噬细胞清除工具，能够有效清除动物体内多个组织和部位（如肝脏、脾脏、肺部、血液等）的巨噬细胞，也是应用最为广泛的巨噬细胞清除方法。

今天给大家分享使用翌圣Clodronate Liposomes（巨噬细胞清除剂）的文章及注意事项，助力大家实验顺利进行。

 案例分享 

小鼠品系：C57BL/6J小鼠；

注射方式：腹腔注射；

取样部位：外周血；

注射剂量：200 μl /只；

抗体选择：F4/80。

检测方法

巨噬细胞耗竭模型采用氯膦酸脂质体，腹腔注射200μL每只小鼠，在注射后24小时，通过流式细胞术检测外周血巨噬细胞数量。

结果

参考文献：Xiong X, Chen S, Shen J, et al. Cannabis suppresses antitumor immunity by inhibiting JAK/STAT signaling in T cells through CNR2. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):99. Published 2022 Apr 6. doi:10.1038/s41392-022-00918-y(IF:18.187)

 巨噬细胞的靶点有哪些？ 

不同组织和器官的巨噬细胞标志物也会有差异。一般在做巨噬细胞清除实验前，应先查找相关文献，找出具体清除部位的巨噬细胞的表面标志物，选择最佳标志物进行流式实验。

 检测方法有哪些？ 

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组织病理学检查：通过对组织切片进行染色，可以直观地观察到巨噬细胞的数量和分布情况。常用的染色方法有免疫组化、免疫荧光等。

流式细胞术：可以对细胞悬液进行分析，检测特定标志物的表达情况，从而确定巨噬细胞的比例和状态。

会遇到哪些问题？

 问 收到Clodronate liposomes（巨噬细胞清除剂）后该如何保存、操作？

收到Clodronate liposomes后，如果不能马上使用，需放置在4℃冰箱。禁止冻存！使用时作为原液使用，不能进行稀释。

问 注射Clodronate liposomes（巨噬细胞清除剂）后动物发生死亡，是什么原因？

①动物注射了不均一的脂质体悬液。建议在使用之前轻轻摇晃混匀。
②体内清除巨噬细胞后会增加例如病毒粒子、细菌或者酵母感染的几率。相关文献中，有喂食小鼠氨苄西林（Ampicillin，1 mg/mL）或多西环素（200 mg/kg饲料)，仅供参考。
③尽量保证无菌环境。

问 有没有参考的试验方案

仅供参考，实际使用应参考相关文献

问 为什么注射Clodronate liposomes（巨噬细胞清除剂）后，外周血检测没有效果？

静脉注射24 h后巨噬细胞清除率可达到80%-90%，一般血液中巨噬细胞在3天后恢复正常，建议在注射后24h进行检测。同时建议搭配免疫组化进行分析。

问 清除效果不好，能不能增加注射体积？

静脉注射时需要依据动物的体重，不能超过0.1ml/10g，但是进行腹腔注射可以适当的增加注射的体积。

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