为满足客户对抗目标靶标物单克隆抗体的迫切需求,博奥森单抗制备团队经过多年的系统深入研究,发现了外源细胞因子对杂交瘤形成与生长调节规律,提出 了一种全新技术方案,通过探明人类干细胞因子bFGF、HFCS对目标多肽以及靶标蛋白阳性杂交瘤形成与生长调节规律,创建了杂交瘤细胞株半固体干细胞培 养基-梯度筛选法(简称"两步筛选法"),突破了常规HAT、HT培养筛选法阳性率低、随机性大的局限。单克隆抗体制备服务最快可在100天内完成单抗制 备过程,并且保证为客户提供2个阳性克隆以及高亲和力的抗体产品。
上海远慕生物公司可根据客户的不同需要提供经济、快速而可靠的单克隆抗体制备的完整解决方案,本项技术服务包括:
- Balb/c纯系小鼠免疫;
- 脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合;
- 抗体产生细胞的ELISA筛选;
- 抗体产生细胞的亚克隆与扩增;
- 指定细胞克隆的体外培养或腹水瘤接种法生产单克隆抗体。
服务周期(天) 制备步骤 制备说明
1 一次免疫 每种抗原免疫5只Balb/c小鼠,抗原与弗氏完全佐剂乳化
22 二次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化
43 三次免疫 抗原与弗氏不完全佐剂乳化;
免疫一周后取血+ELISA检测效价。
57 加强免疫 单独抗原直接免疫;
三天后采血(血清做阳性对照),取脾。
60 细胞融合 SP2/0骨髓瘤细胞与小鼠(ELISA效价较高)的脾细胞融合
70-100 HAT选择杂交瘤细胞 ELISA效价检测筛选阳性细胞克隆
杂交瘤细胞的亚克隆
至少进行2~4次杂交瘤细胞的亚克隆,直至细胞上清的ELISA结果阳性率达到100%,将完成细胞建株 。
115-120 亚类鉴定 对杂交瘤细胞株所分泌的抗体进行亚类测定
120 冻存细胞株 每种抗原提供2株杂交瘤细胞
121-140 制备腹水并纯化 接种细胞制备腹水、Protein A/G纯化